Cinética enzimática . Velocidad de reacción versus tiempo(VRx vs T)
Enviado por Raul Lopez Huarag • 29 de Octubre de 2015 • Informe • 1.149 Palabras (5 Páginas) • 212 Visitas
Cinética enzimática
- Observaciones
En este ensayo vamos a ver como se produceuna hidrolisis en sus fases dependiendo de parámetros físicos como la temperatura, pH y velocidad de reacción en calor a temperatura constante dependiendo de la concentración de la enzima de la más diluida a la más concentrada todos ellos con almidón como sustrato.
- Resultados
Velocidad de reacción versus tiempo(VRx vs T)
Primer tubo de ensayo
La amilasa salival ha sido desnaturalizada por la temperatura alta antes de agregar el sustrato y después de agregado también se llevó a baño maria por 38°C por un tiempo de 15minutos, se realiza una prueba cualitativa con el indicador en frio y resulta un color azul, resultando que el almidón como sustrato está intacto sus moléculas siguen unidas ósea una hidrolisis incompleta, ya que no le afecto la enzima por estar desnaturalizada.
Segundo tubo de ensayo
Se agrega 1ml de amilasa y 4ml de almidón y después llevar a baño maría a temperatura 38°C por un tiempo e 15 minutos, luego agregamos 1 a 2 gotas de lugol como resultado tenemos una coloración amarillenta, la enzima rompió los enlaces de glucosa del almidón, produciendo una hidrolisis completa.
Tercer tubo de ensayo
Se agrega 1ml de amilasa salival, se procede a llevar a un baño de hielo por un tiempo de 5 minutos y agregar 4ml de almidón y después llevar a baño de hielo por un tiempo de 15 minutos. Como resultado obtenemos un color concho de vino esto quiere decir que se produjo la inhibición parcial de la enzima ya que si hubiera sido total la inhibición nos hubiera dado un color azul es una catálisis parcial.
Velocidad de reacción versus pH (VRx vs pH)
En el primer tubo de ensayo
Se agrega 1ml de amilasa salival más V gotas de HCl al 10% y más 4ml de almidón y finalmente llevar a baño maria apir 38°C por un tiempo de 15minutos, el resultado obtenido agregamos unas 2 gotas de lugol y nos da un color azul marino intenso debido a la desnaturalización en medio acido de la enzima.
En el segundo tubo de ensayo
Se agrega 1ml de amilasa salival más 4ml de almidón y finalmente llevar a baño maria a 38°C por un tiempo de 15 minutos,en el resultado final del ensayo para verificar que tipo de hidrolisis nos resulta, agregamos lugol ynos resulta un color amarillo lo cual representa que se produjo una hidrolisis completa del sustrato desdoblándose sus pentosas.
En el tercer tubo de ensayo
Se agrega 1ml de amilasa salival y V gotas de NaOH al 10% más 4ml de almidón y finalmente llevar a 38°C por un tiempo de 15 minutos. Como resultado final del ensayo y para verificar que tipo de hidrolisis se produjo agregamos lugol se produce una cierta cantidad de coloración azul marino oscuro resultando una hidrolisis negativa pero al diluir el tubo de ensayo se desvanece totalmente y se torna a una solución transparente.
Justificación: En la desnaturalización de la enzima en medio alcalina debería prevalecer el color azul oscuro ya que el almidón está intacto, se está entonces produciendo una interacción física por el medio alcalino que impide que el yodo del lugol se adhiera a las moléculas del almidón.
- Velocidad de reacción versus la concentración de la enzima VRx vs (E)
Coger cinco tubos de ensayos grandes y rotular
Sistema 1
Primer tubo de ensayo 1/10 1ml de amilasa y 9ml de agua y homogenizar [pic 1]
[pic 2][pic 3]
Segundo tubo de ensayo 1/20 [pic 4][pic 5]
Tercer tubo de ensayo 1/40[pic 6][pic 7]
Cuarto tubo de ensayo 1/80[pic 8][pic 9]
[pic 10]
Quinto tubo de ensayo 1/160
Sistema 2
De todo los tubos de ensayo del sistema 1 tomar una alicuota de 1ml
[pic 11][pic 12][pic 13][pic 14][pic 15]
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