Cloroplastos

Para la obtención de cloroplastos presentes en la hoja de espinaca se realizó una homogenización y posteriormente una centrifugación diferencial, para esta se utilizó una solución de NaCl y una mezcla de fosfatos como buffer a pH 8, dicho buffer amortiguó los cambios bruscos que ocurren en el medio extra e intracelular, esto lo logra cediendo o aceptando electrones rápidamente; la función de la solución salina fue la de estabilizador y para romper las membranas celulares. Al preparar los tubos blanco y los tubos problema se agregó a ellos una delgada capa de aceite para que éste aislara los cloroplastos del O2 presente en la atmosfera.

Como mencionamos en las observaciones, no se obtuvieron los resultados deseados en esta práctica, en la siguiente tabla se muestran los resultados que debimos haber obtenido.

Condiciones Tubo blanco Tubo problema

Oscuridad Azul Fuerte Azul fuerte

Luz artificial Verde Intenso

Luz natural Verde

En la fotosíntesis los Cloroplastos reducen al NADP y lo transforman en NADPH durante la fase luminosa. En la fase luminosa es donde la energía lumínica captada por los cloroplastos, se convierte en energía química. En la reducción del NAD, el NADP experimenta reducción reversible del anillo de la nicotinamida este se reduce a NADPH + H+ aceptando un ion hidruro a partir de un sustrato oxidable. El ion hidruro se puede adicionar en la parte frontal o posterior de la carga positiva del átomo del nitrógeno del anillo plano de la nicotinamida. El segutno protón eliminado del sustrato se libera al disolvente acuoso. La reacción es:

NADP+ + 2e- + 2 H+ -> NADPH + H+

Durante la práctica utilizamos 2,6-diclorofenolindofenol 1x10^-5 que es un compuesto orgánico que se uso como sustituto para comprobar la capacidad reductora de los cloroplastos. Este compuesto tiene la ventaja de ser de color azul (a pH neutro) cuando está oxidado, mientras que es incoloro en la forma reducida. La reacción que presenta el 2,6- Diclorofenolindofenol es la siguiente:

En la tabla numero ___ podemos observar cómo los tubos que sometimos a la oscuridad no hubo ningún indicio de cambio aparente, esto es debido a que la actividad de los cloroplastos solo se realiza en presencia de luz, al carecer la muestra de ésta no se pudo llevar a cabo la reacción.

Un par de tubos se sometieron a luz artificial, en ellos debió haber ocurrido un cambio de color a un verde muy intenso, esto debido a que este tipo de luz presenta una intensidad muy fuerte ocasionando que la actividad reductiva de los cloroplastos se magnifique.

Los últimos tubos se expusieron a luz natural, en ellos se observó un color verde más débil que el observado en luz artificial, esto debido a una actividad menor por parte de los cloroplastos.

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