Cromatografia De Aminoacidos

“CROMATOGRAFIA DE AMINOACIDOS”

OBJETIVOS:

Separación de aminoácidos por cromatografía de papel.

Revelado de los aminoácidos mediante la reacción coloreada con la ninhidrina.

Cálculo del valor de Rf para cada uno de los aminoácidos.

INTRODUCCION

La cromatografía se engloba dentro de las llamadas técnicas de separación y permite el análisis de mezclas complejas de compuestos muy estrechamente relacionados químicamente. Son varias las modalidades usadas y se clasifican según la fase móvil (de gases, líquida) y por el tipo de soporte (columna, capa fina, papel) usados.

La separación se lleva a cabo según la distinta interacción que presenta cada uno de los componentes de una muestra respecto a dos fases: una estacionaria y otra móvil que fluye sobre ella. Esta interacción puede ser de varios tipos que a su vez dan lugar a distintas subclases de cromatografía: de absorción, de reparto, de cambio iónico, de afinidad, etc.

En esta práctica, se usó la técnica más simple, la cromatografía ascendente sobre papel. La fase estacionaria es la celulosa del papel y la móvil una mezcla de disolventes orgánicos y agua. La celulosa retiene una cierta cantidad de agua entrelazada entre sus fibras y puede dar lugar a un mecanismo de reparto de los componentes de una muestra aplicados sobre ella cuando se hace fluir un disolvente de polaridad distinta de la del agua. Según la solubilidad que tengan los componentes de la muestra respecto de las dos fases así será su movilidad.

¿QUÉ ES UN AMINOACIDO?

Los aminoácidos son compuestos orgánicos formados por carbón nitrógeno oxigeno e hidrogeno, algunos poseen también azufre. se nombran aminoácidos puesto que contienen un grupo funcional amino y un grupo carboxilo sus funciones son:

Síntesis de proteínas precursores de otras moléculas no proteicas de importación biológica

Donadores de N para moléculas no proteicas

Fuentes de energía cuando los lípidos y los carbohidratos no están disponibles

Se clasifican en no polares y polares sin carga

Aminoácidos ácidos (con carga negativa)

Aminoácidos básicos (con carga positiva)

MATERIAL

Cámara cromatográfica

Papel para cromatografía (16 x 18)

Estufa 90° C

Capilares

REACTIVOS

Aminoácidos a 0.05M (Lisina, Prolina, Leucina y mezcla)

Solvente: n-Butanol, ácido acético glacial, agua

Revelador: solución de ninhidrina

Hidróxido de amonio concentrado

METODOLOGIA

Paso 1.-

Se traza a 1,5 cm del borde inferior del papel de celulosa una línea con lápiz y sobre ella se marcan 3 puntos a 1,5, 3,0 y 4,5 cm, escribiendo debajo de cada uno de ellos el nombre de aminoácido correspondiente tal como se indica en la figura. Hay que evitar poner los dedos en la parte central del papel ya que al final saldrían nuestras huellas dactilares.

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Paso 2.-

En cada punto (identificados con el nombre de cada uno de los aminoácidos) se aplicarán gotas de la solución de aminoácidos y solución problema (un aminoácido en cada punto y en el último la solución problema).

Se utiliza un capilar para aplicar la muestra gota a gota (hacerlo con mucho cuidado).

Paso 3.-

Se añade a la cámara cromatográfica el eluyente hasta una altura aproximada de 1 cm y sin que éste alcance la zona de aplicación de las muestras. Se mete el papel en la camara, se tapa y se deja desarrollar la cromatografía hasta que el eluyente alcance el borde superior, sin llegar a sobrepasarlo.

Paso 4.-

Terminada la cromatografía se saca la placa, se marca la distancia recorrida por el eluyente, se seca dentro de la campana de gases y se rocía con un pulverizador que contiene la solución reveladora Ninhidrina.

RESULTADOS

El reparto de los aminoácidos en el papel se debe a su naturaleza química.

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