Cromatografia

La cromatografía es una técnica de separación de solutos de una mezcla, que se basa en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los solutos a través de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento. A este disolvente se le llama fase móvil y el medio poroso puede ser la fase estacionaria, o bien servir de soporte a esta fase. La separación cromatográfica constituye un proceso dinámico que permite un intercambio continuo por desplazamiento de una fase con respecto a la otra. El diferente reparto de solutos entre las fases móvil y estacionaria es la causa de la separación de los solutos. El soluto que tiene mayor afinidad por la fase estacionaria se moverá con mayor lentitud.

La cromatografía en papel se utiliza para la separación de cantidades mínimas de soluto y también como un criterio de pureza. Se basa en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los solutos a través de una fase estacionaria que es el agua retenida sobre un soporte sólido e inerte (celulosa), arrastrado por un disolvente en movimiento.

Una vez realizada la cromatografía, la posición de los componentes se determina mediante una técnica que permita “visualizarlos”. Es común revelar el cromatograma mediante reacciones que originen productos coloreados, como la ninhidrina.

El fundamento del revelado con ninhidrina es el siguiente: La ninhidrina reacciona con aminoácidos que tengan el grupo amino libre, dando lugar a la formación de amoníaco y anhídrido carbónico, con reducción del reactivo (la ninhidrina) a hidrindantina. La hidrindantina reacciona a su vez con amoníaco y otra molécula de ninhidrina para dar un compuesto de adición doble que presenta una coloración azul-púrpura, con la excepción de la prolina que da una coloración amarillenta, debido a que su grupo amino está sustituido.

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