Cuestionario 5 de la practica de microbiologia

Instituto Politécnico Nacional[pic 1]

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

 Guzmán Serrano Omar  

Robles Montaño María Alejandra

P 1. Reacciones de aminoácidos y proteínas

Sección 1   4QM2

[pic 2]OBJETIVOS

• Determinar la presencia del aminoácido cisteína en la gelatina, peptona y albúmina utilizando la prueba de plomo.
• Determinar si hay aminoácidos con grupo fenol en la gelatina, peptona y albúmina utilizando la prueba de Millón.
• Identificar si hay presencia de triptófano en la gelatina, peptona y albúmina a través de la prueba de Hopkins-Cole.
• Identificar la presencia de grupos aromáticos activados en la gelatina, peptona y albúmina con la reacción Xantoproteica.
• Determinar si la gelatina, peptona, albúmina y aspartame contienen más de 2 enlaces peptídicos con la prueba de Biuret.

RESULTADOS

Tabla 1. Resultados obtenidos de las pruebas de aminoácidos y proteínas hechas.

Nota: (-) es un resultado negativo. (+) es un resultado positivo y (/) fue que no se hizo esa prueba con la muestra.

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Figuras 1 y 2. Resultados de la prueba para sulfhidrilos.

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Figuras 3 y 4. Resultados de la reacción de ninhidrina.

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Figura 5. Resultados de la prueba Hopkins-Cole.

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Figuras 6 y 7. Resultados de la reacción de Millón.

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Figura 8. Resultado de la reacción Xantoproteica.

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Figuras 9 y 10. Resultados de la prueba de Biuret.

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Figuras 11 y 12. Resultados de la prueba de Biuret.  El tubo de la derecha corresponde a la muestra de gelatina.

DISCUSIONES

La reacción de plomo es para evidenciar la presencia de grupos sulfhidrilos en las cadenas de las muestras problema, que son la gelatina, peptona y albúmina. El único aminoácido con un grupo sulfhidrilo es la cisteína, entonces la prueba es para identificar la presencia de la cisteína en cualquiera de las muestras problema. Nuestro control negativo fue el agua y el control positivo fue la cisteína. Nosotros obtuvimos que la albúmina era positiva mientras que la gelatina y la peptona eran negativas. La albúmina es la proteína más abundante de la clara de huevo (ovoalbúmina), que tiene la mayoría de los grupos sulfhidrilo, aminoácidos como la cisteína (Santos, M. 1995), lo que concuerda con nuestros resultados. La gelatina, por otro lado, es una proteína completa derivada de la hidrólisis de colágeno de restos de animales. La gelatina no contiene cisteína en su cadena de aminoácidos, según la Manufacturera de Gelatinas de Europa, lo que explica el porque dio negativo en nuestros resultados. Por otro lado, la peptona si contiene cisteína (Laboratorios Condalab, 2019), sin embargo, cuando observamos cómo es la estructura final, las cisteínas de la cadena están unidas por enlaces disulfuro, así que no están libres para reaccionar con el plomo en condiciones básicas. Debido a esto, la prueba da negativa.

La reacción de Biuret es específica para la medición del enlace peptídico, por lo que sólo se recomienda para la cuantificación de proteínas, más no de hidrolizados (Badui, 2006). En un medio fuertemente alcalino se agrega una solución de sulfato cúprico, que formará un complejo de coordinación con dos enlaces peptídicos adyacentes de color violeta o púrpura, entre más intenso sea el color demuestra una mayor presencia de enlaces peptídicos. Si la respuesta es negativa, se quedará de color azul, del sulfato cúprico. En el caso de la gelatina, se cayó el tubo de ensayo, por lo que perdimos la muestra, sin embargo en la foto se aprecia la muestra que sobra y se observa un color violeta claro. Se observa lo mismo con la albúmina. En la peptona se observa de un color amarillo ya que la solución de peptona ya contenía un color, que se acentúo al dar una reacción positiva en esta reacción. La tirosina, el triptófano y la fenilalanina dieron negativo ya que son solo aminoácidos sin un solo enlace peptídico. El agua es nuestro control negativo. En el caso del aspartame, hay que saber que el aspartame es un éster metílico de un dipéptido formado por fenilalanina y ácido aspártico (Teresa Guerrero Villegas y Galo Mora Flores, 2014), por lo que solo contiene un enlace peptídico, insuficiente para que forme el complejo de coordinación con el sulfato cúprico, lo que explica que de negativo a la reacción de biuret.

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