DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS

Las pruebas colorimétricas para la determinación de azúcares se basan en la reacción específica de estos compuestos con determinados reactivos para dar derivados coloreados. La formación de color se toma como resultado positivo e indica la presencia del compuesto en cuestión, mientras que la no formación de color es indicativo de su ausencia.

En la reacción de Molish, cuando se adiciona el ácido sulfúrico concentrado a una disolución de azúcar provoca la deshidratación del glúcido en la interface, para dar un anillo de furfural o hidroximetilfurfural que reacciona con -naftol para dar un producto de color

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púrpura (figura 2). En la tabla 1 se evidencia que la mayoría de los monosacáridos dieron positivos, es decir que por deshidratación formaron furfural en arabinosa y xilosa (derivados de pentosas). Aunque son pruebas especificas de monosacáridos, los disacáridos como maltosa y los polisacáridos como celulosas y almidón, también dan positivos, ya que en medio ácidos cataliza la hidrólisis de los enlaces glucosúdicos, por lo que las reacciones también son válidas.

La reacción de Selivanoff, se basa en que las cetosas se deshidratan más rápidamente que las aldosas. El furfural formado reacciona con resorcinol para dar un producto coloreado (figura 3). La fructosa da positivo debido a que en el carbono 2 tienen una función cetona, que en presencia de un ácido fuerte producen rápidamente derivados furfúricos que reaccionan con el difenol, que está contenido en el reactivo de Seliwanoff. La sacarosa da negativa ante esta prueba ya que la molécula, si bien esta formada por glucosa y fructosa, en la unión de estas se anulan las propiedades reductoras de ambas, en este caso, probablemente ocurrió una hidrólisis ácida convirtiendo ésta en un azúcar invertido o invertasa por lo que se rompió el enlace α (1-2) y permitió que la sacarosa diera positiva con esta prueba y se presentara una coloración rosácea. La muestra desconocida dio positiva, es que la misma era una cetosa

La prueba de Bencidina tiene como fundamento el hecho de que, dentro del grupo de los monosacáridos, las pentosas son mucho más fáciles de deshidratarse que las hexosas, y que en su forma furfural (deshidratada), las pentosas presentan capacidad reductora. Es por esos que este reactivo se usa combinado con ácidos (como el HCl). En el caso de que se use un ácido débil para determinar un carbohidrato desconocido, éste solo afectará a las pentosas con lo que la reacción cambiará de un color azul a un color rojo. El resultado experimental no dio positivo para ningún carbohidrato esto pudo deberse a que se adiciono mayor cantidad de reactivo o que este estaba contaminado.

Para la reacción de Benedict existen diversos métodos de cuantificación de carbohidratos basados en la capacidad reductora de los azúcares que tienen libre el grupo carbonilo y su OH anomérico libre; como lactosa,

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