DETERMINACIÓN DE PROTEINAS Método Kjeldahl

INSTITUTO DE SALUD PUBLICA DE CHILE

SUBDEPARTAMENTO LABORATORIOS DEL AMBIENTE

SECCION QUÍMICA DE ALIMENTOS

DETERMINACIÓN DE PROTEINAS

Método Kjeldahl

PRT-701.02-150

Rev N°: 0

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1.- OBJETIVO

Determinar la concentración de nitrógeno presente en la muestra para luego ser transformado

a través de un factor en proteína.

2.- ALCANCE Y CAMPO DE APLICACIÓN

El método es aplicable a alimentos en general.

3.-FUNDAMENTO

El método se basa en la destrucción de la materia orgánica con ácido sulfúrico concentrado,

formándose sulfato de amonio que en exceso de hidróxido de sodio libera amoníaco, el que

se destila recibiéndolo en:

a) Acido sulfúrico donde se forma sulfato de amonio y el exceso de ácido es valorado con

hidróxido de sodio en presencia de rojo de metilo, o

b) Acido bórico formándose borato de amonio el que se valora con ácido clorhídrico.

4.- REFERENCIAS

4.1.- A.O.A.C. Official Methods of Analysis 13 th Edition, 1984.

4.2.- FAO Food and Nutrition Paper 14/7 Roma, 1986

5.- TERMINOLOGIA

N/A

5.- MATERIAL Y EQUIPO

5.1.- Balanza analítica, sensibilidad 0.1 mg.

5.2.- Equipo Kjeldahl

5.3.- Manto calefactor

5.4.- pHmetro

5.5.- Material usual de laboratorio.

6.- REACTIVOS

6.1.- Acido sulfúrico concentrado, p.a.

6.2.- Sulfato de potasio o sulfato de sodio, p.a.

6.3.- Sulfato cúprico, p.a.

6.4.- Solución de hidróxido de sodio al 15 % . Disolver 150 g de NaOH y completar a 1 litro.

6.5.- Solución de ácido sulfúrico 0.1 N. Tomar 2.7 mL de H2SO4

conc. y completar a 1 litro,

luego estandarizar con Na2CO3

anhidro p.a.

6.6.- Solución de hidróxido de sodio al 30 %. Disolver 300 g de NaOH y completar a 1 litro.

6.7.- Solución indicadora de rojo de metilo al 1 % en etanol. Disolver 1 g de rojo de metilo en

100 mL de etanol (95 %).INSTITUTO DE SALUD PUBLICA DE CHILE

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6.8.- Solución de hidróxido de sodio 0.1 N. Tomar 4 g de NaOH y enrasar a 1 litro con agua

recientemente hervida y enfriada. Valorar con ácido succínico.

6.9.- Acido bórico al 3 % . Disolver 30 g de ácido bórico y completar a 1 litro.

6.10.- Indicador de Tashiro: rojo de metilo al 0.1 % y azul de metileno al 0.1 % en relación de

2:1, en alcohol etílico.

6.11.- Solución de ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar 8.3 mL de HCl conc. y enrasar a 1 litro.

Valorar con Na2CO3

anhidro.

7.- PROCEDIMIENTO

7.1.- Realizar la muestra en duplicado.

7.2.- Efectuar un ensayo en blanco usando una sustancia orgánica sin nitrógeno (sacarosa) que

sea capaz de provocar la reducción de los derivados nítricos y nitrosos eventualmente

presentes en los reactivos.

7.3.- Pesar al 0.1 mg. alrededor de 1 g de muestra homogeneizada (m) en un matraz de digestión

Kjeldahl.

7.4.- Agregar 3 perlas de vidrio, 10 g de sulfato de potasio o sulfato de sodio, 0.5 g de sulfato

cúprico y 20 mL de ácido sulfúrico conc.

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