Detección de la actividad de la β-fructofuranosidasa en un extracto de levadura

RESULTADOS LABORATORIO N°3

Detección de la actividad de la β-fructofuranosidasa en un extracto de levadura

Para calcular la concentración enzimática deben utilizar la fórmula:

C1*V1=C2*V2

Ejemplos:

Tubo A1: C1 * V1=C2 * V2

1/250 * 1 mL = x * 3 mL Volumen de reacción (1ml de Enzima + 1ml Buffer +1 mL Sacarosa)

X= 1/750  1,33 *10-3

Tubo B1: C1 * V1=C2 * V2

1/250 * 0,5 mL = x * 3 mL Volumen de reacción (0,5ml de Enzima + 1,5ml Buffer +1 mL Sacarosa)

X= 1/1500  6,66 *10-4

Recalcular [Glucosa] para conocer la [Glucosa] antes de la dilución:

C1 * V1=C2 * V2  C1 = concentración buscada (x mmoles)

V1 = volumen de reacción (3mL)

C2 = concentración obtenida de la ecuación de la recta (mmoles)

V2 = volumen total al diluir (15 mL)

Tubo [Solución enzimática] Absorbancia [Glucosa]

(mmoles) Velocidad de reacción

(mmoles de Glucosa/5min)

A1 1/750

A2

A3

A4

B1 1/1500

B2

B3

B4

Patrón

Graficar Fracción A y Fracción B, (velocidad de reacción (mmoles de Glucosa/5min) en función de la concentración de enzima) por ejemplo:

Figura 1. Gráfico de la relación entre la concentración de la enzima y su efecto en la velocidad de reacción (mM/5min) de la reacción catalizada por la -fructofuranosidasa

Influencia de la temperatura sobre la actividad de la β-fructofuranosidasa

Recalcular [Glucosa] para conocer la [Glucosa] antes de la dilución:

C1 * V1=C2 * V2  C1 = concentración buscada (x mmoles)

V1 = volumen de reacción (3mL)

C2 = concentración obtenida de la ecuación de la recta (mmoles)

V2 = volumen total al diluir (20 mL)

Tubo Temperatura

(°C) Absorbancia [Glucosa]

(moles) v

(moles de Glucosa/min)

1

2

3

4

5

6

7

8

Patrón

Influencia del pH sobre la actividad de la β -fructofuranosidasa

Recalcular [Glucosa] para conocer la [Glucosa] antes de la dilución:

C1 * V1=C2 * V2  C1 = concentración buscada (x mmoles)

V1 = volumen de reacción (3mL)

C2 = concentración obtenida de la ecuación de la recta (mmoles)

V2 = volumen total al diluir (15 mL)

Tubo pH Absorbancia [Glucosa]

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