Determinacion De Fosfatasa Alcalina

DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ALCALINA”

I.- OBJETIVO.

El alumno realizará la determinación de Fosfatasa Alcalina en el suero sanguíneo mediante la técnica de espectrofotometría y empleará los conocimientos adquiridos en clase para realizar la interpretación de los resultados.

II.- INTRODUCCIÓN.

Distribuida en casi todos los tejidos del cuerpo, los niveles de Fosfatasa Alcalina son de interés para el diagnóstico de enfermedades hepatobiliares y enfermedades de los huesos. La mayoría de la Fosfatasa Alcalina normal en suero proviene del tracto biliar. Los niveles normales de la Fosfatasa Alcalina dependen de la edad, y son elevados durante períodos de crecimiento óseo. Los aumentos moderados del nivel de Fosfatasa Alcalina (sin incluir el hígado y el hueso) se pueden atribuir al mal de Hodgkin, congestión cardiaca y a infecciones bacterianas estomacales. También hay aumento en el tercer trimestre del embarazo.

Principio:

F. Alc

La secuencia enzimática de la reacción es la siguiente:

p-Npp + H2O p-Nitrofenol + H3PO4

El p-Nitrofenil Fosfato (p-Npp) es hidrolizado a p-Nitrofenol y fosfato inorgánico.

III.- MATERIAL Y REACTIVOS.

• Pipetas volumétricas Reactivo de Fosfatasa Alcalina

• Tubos

• Gradilla

• Cronómetro

• Espectrofotómetro Material Biológico: Suero

• Centrífuga

• Pipetas Automáticas

IV.- PROCEDIMIENTO.

1. Etiquetar el tubo como Problema.

2. Pipetee 3.0ml de reactivo de Fosfatasa Alcalina y permita que equilibre a 37° C.

3. Ponga en cero el espectrofotómetro con agua a 405nm.

4. Agregue 0.1ml (100µl) de suero problema al tubo con reactivo.

5. Mezcle por inversión y accione el cronómetro y colóquelo en Baño María a 37° C.

6. Después de 1 minuto lea la absorbancia (A1) y regrese el tubo a 37° C por 2 minutos más.

7. Después de 2 minutos exactos lea y registre la absorbancia (A2).

V.- CÁLCULOS.

La diferencia entre las absorbancias (A2-A1) multiplicada por el factor 551 nos da los resultados en UI/L de Fosfatasa Alcalina

• Valores de Referencia de Albumina: 25 – 90 UI/L a 37° C

VI.- DIAGRAMA DE FLUJO

VII. OBSERVACIONES Y DIBUJOS

VIII.- INTERPRETACIÓN.

IX.- CONCLUSIONES.

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