Determinancion de Proteinas

REPORTE  DE LA PRÁCTICA DETERMINACIÓN DE PROTEINA

DEPARTAMENTO:

Ingeniería Química y Bioquímica

PRÁCTICA:

DETERMINACIÓN DE PROTEINA

CURSO:

ANALISIS INDUSTRIALES

CONTENIDO

CONTENIDO        

1. DETERMINACIÓN DE PROTEINA EN LA ALMENDRA        

1.1 OBJETIVO        

2. ANTECEDENTES        

DIGESTIÓN        

NEUTRALIZACIÓN Y DESTILACIÓN        

TITULACIÓN        

3. MATERIALES        

3.1        EQUIPOS.        

3.2        REACTIVOS.        

4.        METODOLOGIA        

5.        RESULTADOS        

5.1        INTERPRETACION DE RESULTADOS        

6.        CONCLUSION        

7.        ANEXO (IMAGENES)        

7.1        ANEXO (PREPARACION DE SOLUCIONES)        

8.        BIBLIOGRAFIA        

1. DETERMINACIÓN DE PROTEINA EN LA ALMENDRA

1.1 OBJETIVO

Determinar el porcentaje de proteína de una muestra de almendra a partir del nitrógeno obtenido mediante el método Kjeldahl

2. ANTECEDENTES

Además de su significado nutritivo las proteínas juegan un papel importante en las propiedades organolépticas de los alimentos.  

El contenido total de proteínas en los alimentos está conformado por una mezcla compleja de proteínas. Estas existen en una combinación con carbohidratos o lípidos, que puede ser física o química.

Actualmente todos los métodos para determinar el contenido protéico total de los alimentos son de naturaleza empírica.  El aislamiento y pesado directo de la proteína proporcionaría un método absoluto, sin embargo, dicho método es llevado a cabo sólo a veces en investigaciones bioquímicas pero es completamente impráctico para el análisis de alimentos.

En 1883 el investigador danés Johann Kjeldahl desarrolló el método más usado en la actualidad para el análisis de proteínas (método Kjeldahl) mediante la determinación del nitrógeno orgánico. En esta técnica se digieren las proteínas y otros componentes orgánicos de los alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores.  El nitrógeno orgánico total se convierte mediante esta digestión en sulfato de amonio.  La mezcla digerida se neutraliza con una base y se destila posteriormente. El destilado se recoge en una solución de ácido bórico.  Los aniones del borato así formado se titulan con HCl (o H2SO4) estandarizado para determinar  el nitrógeno contenido en la muestra.

El resultado del análisis es una buena aproximación del contenido de proteína cruda del alimento ya que el nitrógeno también proviene de componentes no proteicos.

REACCIONES LLEVADAS A CABO EN EL MÉTODO DE KJELDAHL        

DIGESTIÓN

        [pic 1]

1)  n - C -NH2  + mH2SO4     catalizadores             CO2 + (NH4)2 SO4 + SO2[pic 2][pic 3]

Proteína                                           calor

NEUTRALIZACIÓN Y DESTILACIÓN

2)  (NH2) SO4 + 2 NaOH                                             2NH3 + Na2SO4+ 2H2O                                                                [pic 4]

3)  NH3 + H3BO3 (ácido bórico)                                   NH4 + H2BO3-   (ión borato)[pic 5]

TITULACIÓN

El anión borato (proporcional a la cantidad de nitrógeno) es titulado con HCl estandarizado:

4)    H2BO3- + H+                                                                                    H3BO3[pic 6]

3. MATERIALES

• Espátula.
• Desecador y sílica gel con indicador.
• Matraz aforado de 200 mL.
• Matraz Erlenmeyer de 250 mL.
• Matraz Kjeldahl de 800 mL que aplique al equipodigestor.
• Pipeta y perilla de succión.
• Bureta.
• Vaso de precipitado de 50, 100 mL.
• Probeta de 100 mL
• Soporte Universal.
• Pinzas para Bureta.
• Gotero.
• Piseta con agua destilada
• Guantes resistentes a altas temperaturas.
• Perlas de vidrio.
• Embudo.

1. EQUIPOS.

• Balanza analítica con sensibilidad de 0,1 mg.
• Digestor de proteínas Kjeldahl tradicional o cualquier otro equipo con características similares.
• Destilador de proteínas Kjeldahl o cualquier otro equipo con características de funcionamientos similares.

1. REACTIVOS.

• Ácido sulfúrico concentrado (H2SO4).
• Hidróxido de sodio (NaOH). 1:1
• Ácido bórico (H3BO3) al 4 %.
• Rojo de metiloal 0.1 %.
• Verde de bromocresol.
• Ácido clorhídrico (HCl) 0.1N (Solución valorada).
• Selenio.

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1. METODOLOGIA

PRIMERA  ETAPA (DIGESTION)

1. Lamuestra de almendra utilizada para ese análisis es en base seca.
2. Pesar una cantidad apropiada de la muestra de almendra aproximadamente 2 gramos por duplicado.
3. Pesar la muestra selénica de 5 a 7 gramos igualmente por duplicado.
4. Posteriormente envolver en un papel libre de impurezas la muestra de la almendra seca junto con el selenio.
5. Transferir la muestra al matraz Kjeldahl, añadir al matraz  35 mL de ácido sulfúrico concentrado.
6. Seguidamente colocar el matraz Kjeldahl en el digestor, hasta que toda la muestra se desintegre y se obtenga una solución translucida de color verde esmeralda, no bebe observarse puntos negros. Hay que girar constantemente el matraz.
7. Esperar a que no haya humo en el interior del matraz, es decir no se sigan desprendiendo gases.
8. Dejar enfriar los matraces a una temperatura de aproximadamente 40 ºC sin apagar el extractor.

SEGUNDA ETAPA (DESTILACIÓN)

1. Añadir con cuidado por las paredes del matraz Kjeldahl 200 mL de agua desionizada y disuelva completamente la muestra, dejarla enfriar, Ponerle el indicador de fenolftaleína de 3 a 4 gotas.
2. Colocar en un matraz Erlenmeyer de 250 mL, 50 mL de solución de ácido bórico al 4 % junto con los indicadores, verde bromocresol y rojo de metilo 0.1 %, dos gotas de cada indicador.
3. Colocar los matraces Erlenmeyer donde se recogerá el destilado.
4. Tomar de nuevo el matraz Kjeldahl para Adicionar lentamente la solución de hidróxido de sodio 1:1 hastaneutralizar la solución  quede de color rosa tenue.
5. Una vez realizada estas acciones comenzar la destilación.Es muy importante que el tapón selle bien la boca del matraz, y que no hay fugas de vapor.
6. Recolectar aproximadamente 250 mL del destilado.

TERCERA (ETAPA TITULACION)

1. Retirar el matraz con el destilado y titularlo con la solución valorada de ácido clorhídrico 0.163 N, hasta que observe el vire.
2. Determine el porcentaje de proteína de acuerdo a la fórmula.

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1. RESULTADOS

• El peso de lasmuestras (almendra seca).

• Normalidad del ácido clorhídrico.

• Volumen del HCl gastados en la titulación.

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