Efecto De Magnesio

EFECTO DEL MAGNESIO (MgCl2)

Concentraciones de MgCl2 a 0 Mm, 2 Mm y 6 mM

Las bandas observada en la figura, de izquierda a derecha, indica que la muestra insertada en el primer pocillo y después de la corrida electroforética no forma bandas, en la segunda posición, forma 2 bandas y en latercera posición, se forman 2 bandas y 2 más no muy claras.

DISCUSIONES:

Diferencias en las concentraciones óptimas de magnesio entre diferentes protocolos de PCR puede en parte ser atribuible a diferentes existencias de ADN polimerasa termoestable y/o por la presencia de químicos (EDTA e iones calcio) que pueden secuestrar o inhibir los iones magnesio (Park y Kohel, 1994).Dependiendo de las concentraciones de la taq polimerasa, si no son las adecuadas puede disminuir las concentraciones de magnesio.

Mayorconcentración de MgCl2, la taq polimerasa produce errores en la replicación, no hay desnaturalización de los primers, por ende produciendo productos inespecíficos no relacionados con la muestra de ADN que se desea amplificar (Devlin, 2004).Debido a esto, se observo formación de bandas tenues en la muestra con 6 mM de MgCl2.

La menor concentración de MgCl2, puede afectar el alineamiento de los primer, la temperatura de disociación de las cadenas tanto de la hebra templada como el amplicon, formación de dímeros de primer, y en la actividad y fidelidad de la enzima (Hays, 2008).No se formaran productos amplificados después de la reacción.

CONCLUSIONES:

A concentración nula (0 mM de MgCl2), no se formaron bandas, ya que la taq polimerasa no pudo utilizar iones de magnesio para continuar con su reacción de síntesis de la cadena de ADN.

Debido a la menor concentración de MgCl2, 2 mM comparada con la de 6 Mm, se formaron 2 bandas; hubo menos productos amplificados y a la vez formación de dímeros de primer.

La mayor concentración de MgCl2ocasionó la acumulación de primers, produciéndosetranscripción errónea de estos, generando productos inespecíficos, no sintetizadas correctamente.

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