Ejercicio Experimental II Identificación De La Estructura De Los órganos Linfoides Primarios Y Secundarios

OBJETIVO

• Identificar la estructura y localización de los diferentes órganos linfoides

primarios, secundario y del intestino a través de sus características

morfológicas y de afinidad por colorantes.

¿CÓMO?

A través de la disección en ratones y la tinción basada en la tinción de

Romanowsky modificada por Wright.

MATERIALES

• Microscopio óptico

• Portaobjetos

• Equipo de disección

• Agujas

• Guantes

• Jeringa de 1mL

• Tela de organza.

• Tabla de disección

• Alcohol

• Aceite de inmersión

• Colorantes de DADE Diff-Quik ®.

o Solución fijadora: 1.8 g/L Triarilmetano en alcohol metílico

o Solución I: 1 g/L Xanteno

o Solución II: 1.25 g/L Thiazine (Mezcla de 0.625 g/L de azur A y

0.625 g/L de azul de metileno)

TÉCNICA

1) Localización de los órganos linfoides.

◙ Sacrificar al ratón por dislocación cervical.

◙ Fijar el ratón a la tabla de disección utilizando las agujas

◙ Rociar alcohol sobre el ratón para facilitar el manejo del mismo.

◙ Realizar una incisión en la piel del ratón en región abdominal del mismo,

retirar con cuidado la piel del ratón hacia los lados y comenzar

la extracción de los ganglios linfáticos y timo. (Esquema)

◙ Depositar 3 ganglios, y el timo en 0.5mL de PBS(por separado),

disgregar con ayuda de agujas el tejido.

◙ Una vez que se extrajeron los ganglios linfáticos obtener el bazo, cortar

una sección de alrededor de 0.04g, colocar el tejido en 0.5mL PBS y disgregar

con la ayuda de el embolo de una jeringa de 1mL y tela de organza.

◙ Una vez obtenidas las suspensiones celulares.

◙ Colocar una gota de la suspensión celular en un porta objetos limpio y

desengrasado.

◙ Cubrir con 100 μL de Diff-Quik Fixative (solución fijadora) dejar actuar

durante 1 minuto.

◙ Escurrir la solución e inmediatamente colocar 100 μL de Diff-Quik

Solución I (Colorante acido) y dejar actuar 30 segundos.

◙ Escurrir la solución e inmediatamente colocar 100 μL de Diff-Quik

Solución II (Colorante Básico) y dejar actuar 60 segundos.

◙ Lavar con agua.

◙ Dejar secar aireando el portaobjetos

◙ Observar al microscopio óptico con el objetivo de 40X y posteriormente a

100X utilizando aceite de inmersión o aceite de bálsamo de Canadá.

2) Observación de la organización del tejido linfoide.

Observar las laminillas de distintos tejidos linfoides a un aumento de 40X y

100X.

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