El estudio de los parámetros que afectan la resolución de los picos de elución en la cromatografía de líquidos

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTOMOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN

Objetivos

Establecer las características principales de la cromatografía de líquidos de alta resolución y su utilidad como método analítico.

Estudiar los parámetros que afectan la resolución de los picos de elución en la cromatografía de líquidos.

Conocer la cromatografía de líquidos de alta resolución de fase inversa o reversa.

Determinar la concentración de cafeína en algunas bebidas por cromatografía de líquidos de alta resolución en fase reversa.

Introducción

La cromatografía líquida de alta eficiencia se encuadra dentro de la cromatografía de elución. En ésta, un líquido (fase móvil) circula en íntimo contacto con un sólido u otro líquido inmiscible (fase estacionaria): al introducir una mezcla de sustancias (analitos) en la corriente de fase móvil, cada analito avanzará a lo largo del sistema con una velocidad diferente que dependerá de su afinidad por cada una de las fases. Esto supone que después de terminado el recorrido de la muestra por la columna, cada una de las sustancias introducidas en el mismo sistema eluirá con un tiempo diferente, es decir, estarán separadas.

Podemos clasificar los distintos tipos de cromatografía líquida, con base en distintas maneras, pero la forma más habitual de clasificación es la realizada con base en la naturaleza de la fase estacionaria, ya que esta es la que impone fundamentalmente el mecanismo de separación; de este modo podemos tener cuatro técnicas:

*Cromatografía de adsorción (líquido –sólido)

La fase estacionaria es un adsorbente y la separación se basa en repetidas etapas de adsorción- desorción.

*Cromatografía de reparto/adsroción (fases ligadas químicamente)

La separación en ese caso, se basa en un reparto de soluto entre la fase móvil y la fase estacionaria.

*Cromatografía de intercambio iónico

Este tipo de cromatografía se da cuando la fase estacionaria presenta en su superficie grupos ionizados capaces de retener selectivamente a iones de signo contrario que circulan en la fase móvil.

Cromatografía de exclusión molecular:

La fase estacionaria, en este caso, es un material poroso de tamaño de poro controlado, que permite la entrada de ciertas moléculas de manera selectiva, dejando fuera otras de otro tamaño.

El mecanismo de retención en los dos primeros casos es similar, variando únicamente el tipo de interacciones que se producen y el cuál de ellas es la predominante.

Cromatografía fase normal:

La fase estacionaria presenta puntos activos de alta polaridad y las interacciones que se producen con el soluto son específicas del grupo activo. La fase estacionaria puede ser un sólido adsorbente (sílice o alúmina), o bien, un soporte al que se unen químicamente moléculas orgánicas que presentan grupos funcionales de alta polaridad (ciano, amino)

Cromatografía de fase reversa:

La fase estacionaria tiene una naturaleza apolar( cadenas hidrocarbonadas, grupos fenilo) y las interacciones que se producen son inespecíficas.

Diagrama de Flujo

Observaciones

Llevamos a cabo una cuantificación mediante HPLC y algunas ventajas de usar HPLC son que puede detectar partículas muy pequeñas (< 10 mm), usa Presiones de 1000 - 6000 psi (pounds square inch = libras por pulgada cuadrada, 1 atm = psi/14.7) es Rápida, Picos angostos (alta eficiencia)Separa compuestos no-volátiles o térmicamente inestables.

El equipo cuenta con una precolumna que tienen la composición similar a la columna cromatográfica, elimina materia en suspensión y componentes de la muestra que se unen irreversiblemente a la Fase estacionaria, sem

Además los solventes usados como fase móvil son solventes orgánicos como agua/ solventes miscibles agua/ soluciones reguladoras de alta pureza esto quiere decir que se les da un tratamiento con Helio, se desgasifica al vació y se le hace una filtración.

El sitema de bombeo requiere una generación de altas presiones (1000-6000 psi), un flujo libre de pulsaciones, que los caudales vayan de 0.1-10mL/min, además de que sean componentes resistentes a la corrosión (acero inoxidable, teflón).

Otra parte importante es la válvula de inyección ya que el volumen inyectado de la muestra es constante y reproducible,

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