Ensayo Reconocimiento Del Laboratorio

1° Rotulo de Medio de Cultivo Comercial.

Sistema de Calidad Certificado

ISO 9001:2000

BRITANIA

WWW.britanialab.com

FORMULA

(en gramos por litro)

Pluripeptona 10.00

Glucosa 40.00

Cloranfenicol 0.00

Agar 15.00

PH: 5.6 ± 0.2 a 25°C

INDUSTRIA ARGENTINA

Producto muy higroscópico

Conservar el envase cerrado a temperatura entre 10-35°C al abrigo de la luz en lugar seco.

SABOURAUD

GLUCOSA AGAR

Este medio puede ser usado para el aislamiento, identificación y conservación de hongos patógenos y saprófitos. Puede ser usado en placas o en tubos de ensayo con cierre hermético.

Uso in vitro

Código B0215006

Lote 568

Vence 06/2015

Cont. Neto 500g.

INSTRUCCIONES

Suspender 65g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. Distribuir y esterilizar 15minutos a 118-121°C. Mantener en lugar fresco, pues la exposición al calor hidroliza los componentes.

Autz por el M.S. y A. S n° 5239

2° MEDIOS DE CULTIVOS. MARCAS COMERCIALES

3° Tipos de siembra de microorganismos

Técnicas de siembra

El método de siembra por estría en placa

Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólido preparado en una placa Petri

(A las placas Petri también se les denomina simplemente placas). Conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. A continuación, se flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar células individuales. A continuación, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola célula, no podemos asegurarlo. Quizás, dos células quedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi con toda seguridad, cultivos axénicos.

Los métodos de siembra diluciones sucesivas

En estos métodos, las suspensiones de células microbianas se diluyen antes de su siembra en placa. Se siguen estas técnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos, que la dilución no se puede realizar en una sola etapa. Por ejemplo, una suspensión con mil millones de células por mililitro debe ser diluida 107 veces para obtener una suspensión con un centenar de células por mililitro, Por tanto, se realizan diluciones seriadas (en varias etapas), normalmente de diez en diez, pero a veces de cien en cien. Para realizar diluciones de diez en diez, se añade 1 ml de la suspensión bacteriana a 9 ml (le medio estéril o solución salina, igualmente estéril. Se agita vigorosamente para diluir las células y el proceso se repite cuantas veces sea necesario. A continuación, se puede proceder de dos maneras diferentes. En el método de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten en placa. Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras crecerán en la superficie. Las colonias superficiales se extenderán y serán más grandes. En el segundo método (extensión en placa), las muestras diluidas se siembran directamente en la superficie de la placa de agar, extendiéndolas con ayuda de un asa de Drigalsky de cristalestéril. La suspensión se absorbe en el agar, dejando las células microbianas sobre la superficie. En ambas técnicas las placas se incuban hasta la aparición de las colonias. Como en el método de siembra por estría, no existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas por extensión o en el agar solidificado sembrado por el método del vertido en placas sean cultivos axénicos hasta que se repita el proceso .Las dos técnicas de siembra por dilución presentan la ventaja de que permiten obtener un mayor número de colonias aisladas que el método de siembra por estría, por tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos. Para obtener un cultivo axénico mediante este método:

(a) Hacer diluciones seriadas de la suspensión bacteriana hasta obtener una muestra con sólo unos pocos cientos de bacterias

(b) verter la muestra en un tubo con agar a sobrefusión, mezclar y verter el contenido en una placa Petri.

(c) Después de la incubación, se desarrollan colonias en el agar (más pequeñas) y en su superficie (más grandes).

Método de aislamiento por siembra por estría en placa:

Para obtener un cultivo axénico:

(a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero

(b) introducirla en la suspensión bacteriana para recoger una muestra

(c) sembrar haciendo estrías sobre la superficie de un medio sólido en una placa Petri, y (d) volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un segundo grupo de estrías en una región nueva de la placa. Repetir el proceso una tercera y una cuarta vez, hasta conseguir que los grupos de células se diluyan y se separen células aisladas.

(e) Después de la incubación, se desarrollan colonias aisladas. Para estar seguro de que el cultivo es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar una colonia aislada y sembrar por estrías una segunda placa.

El crecimiento de los cultivos axénicos

Una vez que se obtiene un cultivo puro, normalmente se ha de propagar (se le hace crecer de nuevo). Para cultivar microorganismos en el laboratorio,

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