Equilibrio

FUNDAMENTO

La mayor parte de las proteínas muestran su solubilidad mínima en su punto isoeléctrico. Algunas de ellas son tan insolubles a este pH; por ejemplo la insulina, la caseina pueden precipitarse de sus soluciones por ajuste del pH al valor de su punto isoelectrico

MATERIAL

Leche no pasteurizada

HCl 0.1 N

NaOH 0.1 N

Solución amortiguadora de acetatos pH 4.6

Indicador verde de bromocresol al 0.04%

Acetato de sodio 0.2 N

Acetato de sodio 0.1 M

Ácido acético 0.1 M

Agua destilada acidulada (100 ml de agua + 10 gotas de HCl 0.1 N)

METODOLOGIA

• Dilúyase 5 ml de leche con 5 ml de agua, en un matraz Erlen-meyer de 50 ml

• Agregar HCl 0.1 N con una pipeta mientras se agita con suavidad la leche diluída, hasta que se forme el primer precipitado abundante.

• Dejar que el precipitado se deposite en el fondo del matraz y tómese el pH del suero sobrenadante por medio del indicador verde de bromocresol, tomando con una varilla un poco del suero y depositándolo junto con el indicador, en un vidrio de reloj.

• Es conveniente comparar con una gota del indicador puesta con la solución buffer pH 4.6; si es necesario se añade sosa o ácido hasta aproximarse a ese pH

• Centrifugar la suspensión durante 5 minutos

• Desechar el suero sobrenadante

• Llenar el tubo de la centrifuga con agua destilada acidulada, disolviendo el precipitado con la ayuda de una varilla de vidrio

• Centrifugar nuevamente y tirar el líquido de lavado

• Añadir al precipitado 12.5 ml de acetato de sodio 0.2 M; disuélvase el precipitado con la varilla hasta formar una suspensión fina

DETERMINACION DEL PUNTO ISOLECTRICO DE LA CASEINA POR ESTUDIO DE SOLUBILIDAD

Indicaciones generales: se tratará de en un principio de preparar soluciones con valores de pH que caigan entre cerca del punto isoeléctrico de la caseina, logrando que la concentración de la proteína sea tal que pueda observarse visualmente el lugar de la máxima precipitación, se usaran soluciones buffer de acetato con lo que se tendrán valores de pH entre 4.0 y 5.5 que es donde la solubilidad de la caseina es mínima

METODOLOGIA

• Diluir la solución de caseina preparada con agua destilada en proporción 1.5 ml de caseina + 8.5 ml de agua, lo que representa 45 mg de caseina si se acepta que la leche contiene 3% de caseina

• Realizar una serie de tubos con soluciones amortiguadoras de acetato, en las siguientes proporciones

TUBO ACIDO ACETICO 0.1M (ml) ACETATO DE SODIO 0.1 M (ml)

1 9.3 0.7

2 8.2 1.8

3 6.3 3.7

4 5.0 5.0

5 3.0 7.0

6 2.1 7.9

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