Esterilización y medios de cultivo

PRACTICA  No. 3

ESTERILIZACION

HABILIDADES

El estudiante conoce y aplica las técnicas de esterilización a diversos materiales, mediante calor húmedo, calor seco y sus usos.        

INTRODUCCION        

La esterilidad es un término utilizado en microbiología para indicar la ausencia de cualquier forma de vida en un objeto determinado y la esterilización es el proceso para llegar a este fin. Los métodos de esterilización utilizados con más frecuencia en los laboratorios, son el calor húmedo (autoclave) y el calor seco (horno)

Para llevar a cabo la esterilización por calor húmedo es necesario envolver los objetos en un material que permita el paso del vapor y que además los proteja posteriormente de la contaminación cuando entren en contacto con el ambiente; de este modo, los matraces, tubos y pipetas deben taparse con algodón y este debe protegerse con papel para que no se humedezca. En el caso de las cajas de Petri, estas se envuelven con papel.

Cuando esterilizamos con calor seco es preferible colocar  las pipetas y las cajas de Petri en cilindros de metal con aberturas que permitan el paso del aire caliente.

MATERIAL

-        Mecheros

-        Horno

-        Olla de presión

-        Budinera  de acero inoxidable con tapa

MATERIAL TRAIDO POR EL ESTUDIANTE

-        Material preparado anteriormente para esterilizar

-        Asa bacteriológica y porta asa

-        Papel estraza  

-        Una bolsa chica para guardar los materiales estériles

ESTERILIZACION EN LA OLLA DE PRESION

La olla de presión  se utiliza para esterilizar utensilios en los laboratorios pequeños; muchos medios de cultivos, diluciones y cultivos descartados, se esterilizan rutinariamente  en este aparato. Muchas veces aunque no siempre se opera a una presión de 15 libras/ pulgadas, aproximadamente  121º C. El tiempo para alcanzar la esterilización  dependerá de la naturaleza del material para esterilizar, el tipo de recipiente y el volumen, el más utilizado es 15 minutos.

PROCEDIMIENTO

1. Colocar el agua hasta el nivel de la canastilla de la olla.
2. Colocar el material a esterilizar en posición a adecuada sobre la canastilla de la olla.
3.  Cerrar la tapa de la olla herméticamente, en base a las flechas señaladas (indicando ABIERTO - CERRADO) y procure que esta esté bien ajustada.
4. Calentar la olla sobre la flama del mechero.
5. Esperar que salga el vapor a chorro del orificio de la tapa y que la aguja del manómetro esté marcando entre 3 a 5 libras/pulgadas.
6. En seguida coloque la válvula giratoria. Algunas ollas de presión la válvula está fija sobre la tapa, en forma de pibote y  al estar marcando entre 3 a 5 libras/pulgadas, únicamente hacemos un movimiento de la válvula hacia abajo.
7. Esperar que el regulador de la olla alcance la presión indicada para esterilizar es decir la aguja del manómetro indicará 121º C  (15 libras/pulgadas) y se inicia el calentamiento.
8. Regular el calor, manteniendo la presión indicada (121º C) y a partir de ahí el periodo de esterilización o tiempo de retención se comienza a contar durante 15 minutos. La aguja del manómetro deberá estar fija marcando  121º C  DURANTE 15 MINUTOS. En caso de que la aguja descienda o supere la presión indicada, regular el calentamiento con la flama del mechero.
9. Terminado el tiempo indicado, apague el mechero, espere que la aguja del manómetro baje a CERO, en seguida quite la válvula giratorio (esto es en la olla de presión con válvula giratorio). En la olla de presión con válvula fija  se mueve el pibote  hacia arriba y esperar que salga el vapor.
10. Retire la tapa, saque los utensilios estériles y déjelos enfriar y secar un poco.
11. Finalmente lave la olla y colóquela en el lugar indicado por el profesor...

NOTAS:

LAS PERSONAS QUE ESTERILICEN, TENDRAN LA RESPONSABILIDAD DE VIGILAR EL TIEMPO QUE DURE EL PROCESO, SIN SEPARARSE DEL LUGAR INDICADO PARA LA ESTERILIZACION, ESTO ES CON LA FINALIDAD DE EVITAR INCIDENTES

ESTERILIZACION POR AIRE CALIENTE (HORNO)

El procedimiento  de esterilización por aire caliente solo se puede emplear en utensilios de vidrio o metal (jeringas, agujas, pipetas, etc.)

1. Prepare el material para esterilizar, del mismo modo que para el método del autoclave
2. Coloque el material en el horno, cuidando de que  no quede apretado, de tal manera que    permita la circulación del aire caliente.
3. Ponga el termostato a la temperatura adecuada (160º - 180º C) y encienda el horno, si hay ventilador verifique que esté funcionando.
4. Vigile el termostato. Cuando llegue a la temperatura deseada (160-180º C)  inicia a vigilar el tiempo durante 60 minutos. Si los materiales de laboratorio son de vidrio, pesados o voluminosos, o si hay polvos, aceites, vaselina, etc., se considera suficiente 2 horas de exposición a 160 – 180º C.
5.  Apague el horno, espere hasta que la temperatura descienda hasta 40º C. Abra la puerta del horno, saque los materiales estériles. El papel empleado para envolver deberá haber tomado un color marrón oscuro.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el método más apropiado para esterilizar el siguiente material?

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