La práctica de la elaboración de los distintos medios de cultivo

PRACTICA 2 “Medios de cultivo”

RESUMEN

Esta práctica consiste en elaborar distintos medios de cultivo, el Mc Conkey, el Kliger, el Mueller-Hinton, el agar nutritivo y el caldo nutritivo.

Después sembraremos en cada medio varios microorganismos y lo dejaremos incubar para observar si existe crecimiento o no.

INTRODUCCIÓN

Sobre cada medio sabemos que:

• Mc Conkey > se elabora en placa, se han de hacer 10 placas, un total de 250 ml. Es un medio selectivo y diferencial. Es selectivo porque tiene mucha concentración de sales biliares que solo permiten que crezcan las enterobacteriáceas (bacterias acostumbradas a vivir en el intestino). Es diferencial porque aquellas enterobacteriáceas que fermenten la lactosa formarán colonias de color rosa. Las que no fermentan la lactosa serán colonias incoloras.

• Kliger > se elabora en tubo, se han de preparar 10 tubos, un total de 100 ml. Es un medio diferencial. Para sembrar primero se hace una picadura (clavando el asa de siembra en el interior del tubo) y otra siembra en la superficie.

Este medio tiene poca glucosa y mucha lactosa. Si una bacteria solo puede fermentar glucosa (no la lactosa) solo hay cambio de color en medio del tubo, se vuelve amarillo. Si fermentan la lactosa o la lactosa y la glucosa, el viraje se produce tanto en la superficie como en el interior, que también se vuelven de color amarillo.

También detecta si la bacteria fabrica ácido sulfhidrico (SH2), en ese caso de produce un precipitado negro.

• Mueller-Hinton > se elabora en placa, se han de preparar 10 placas, un

total de 250 ml. Se usa para antibiograma porque es un medio donde los

antimicrobianos difunden muy bien.

• Agar nutritivo > se elabora en placa, necesitaremos 20 placas, un total

de 500 ml. Es el medio mínimo que necesitan para crecer, excepto los

anaerobios estrictos.

• Caldo nutritivo > se elabora en tubo, se han de preparar 5 tubos, un total

de 50 ml. Es lo mismo que el anterior pero le falta el agar, es un medio

liquido, no está solidificado.

MATERIAL Y MÉTODOS

Material:

-placas de petri

-tubos

-polvos de los medios de cultivo

-balanza

-incubadora

-gradilla

-asas de siembra

-fuego

-matraz erlenmeyer

-pipetas

-autoclave

Método:

Esta práctica la hemos dividido en diferentes partes, porque hacerlo todo en un mismo día era imposible.

Primero hemos mirado la composición de los medios de cultivo y el proceso para elaborarlos:

-Mc Conkey > su composición és: peptonas (20gr/l), lactosa (10gr/l), sales biliares (5gr/l), cloruro sódico (5gr/l) y rojo neutro (0.075gr/l).

Para elaborarlo primero disolvemos 40gr de polvo en 1l de agua destilada calentando si es preciso. Distribuimos en tubos con campana de Durham y esterilizar al autoclave durante 15 minutos a 121ºC. Luego le añadiremos 15gr de agar para hacerlo solidificar.

-Kliger > su composición és: extracto de carne (3gr/l), extracto de levadura (3gr/l), peptonas (20gr/l), lactosa (10 gr/l), destrosa (1gr/l), cloruro sódico (5gr/l), citrato amonico y Fe2+ (0.50gr/l), rojo fenol (0.03gr/l) y agar (15gr/l).

Para elaborarlo primero suspendemos 58gr del polvo en 1l de agua destilada y lo llevamos a ebullición. Lo distribuimos en los 10 tubos y los esterilizamos al autoclave durante 15 minutos a 121ºC. Luego lo dejamos enfriar en cuña.

-Mueller-Hinton > su composición és: peptonas (17.5gr/l), extracto de vaca (4gr/l), almidón (1.5gr/l), agar (15gr/l).

Para elaborarlo primero añadimos 38gr de polvo en 1l de agua destilada. Luego calentamos hasta que se diluya totalmente. Esterilizamos al autoclave durante 15 minutos a 121ºC.

-Agar nutritivo > su composición és: extracto de carne (1gr/l), extracto de levadura (2gr/l), peptonas (5gr/l), cloruro sódico (5gr/l) y agar (15gr/l).

Para elaborarlo primero suspendemos 28gr de polvo en 1l de agua destilada y lo llevamos a ebullición. Luego esterilizamos al autoclave durante 15minutos a 121ºC.

-Caldo nutritivo > su composición és: extracto de carne (1gr/l), extracto de levadura (2gr/l), peptonas (5gr/l) y cloruro sódico (5gr/l).

Para elaborarlo disolvemos 13 gr de polvo en 1l de agua destilada, calentando si es preciso. Luego lo distribuimos en los recipientes y esterilizamos durante 15 minutos a 121ºC.

Para averiguar cuantos gramos de cada polvo del medio necesitábamos hemos tenido que hacer unos cálculos que són:

-Mc Conkey > 250ml x 40gr/1000ml =10gr de polvo del medio Mc Conkey + 250ml de agua destilada.

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