Medios De Cultivo: Pruebas Bioquímicas

MEDIOS DE CULTIVO

 Triple Sugar Iron (TSI):

Un medio para la diferenciación de Enterobacteriaceae basado en la producción de sulfuro de hidrógeno y fermentación de lactosa, sucrosa y dextrosa.

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro (Britania, 2010).

 Las reacciones correspondientes son (fig. 1):

1. Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificará el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de glucosa, el medio permanecerá de color rojo.

2. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su superficie volviéndolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuará de color rojo.

3. Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro), se presentará un ennegrecimiento del tubo. La producción de sulfhídrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentación de la glucosa (fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa.

4. Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es productora de gas.

 Composición:

Compuesto Cantidad (gr)

Peptona 15

Extracto de levadura 3

Extracto de carne 3

Proteosa de peptona 5

Glucosa 1

Lactosa 10

Sacarosa 10

Sulfato de hierro 0.20

Cloruro sódico 5

Tiosulfato de sodio 0.30

Rojo fenol 0.024

Agar 12

 Clasificación en género y especie de enterobacterias

Microorganismo Producción de gas Producción de ácido sulfihídrico

Escherichia coli + -

Klebsiella pneumoniae + -

Proteus mirabilis + +

Shigella typhimurium - +

Shigella enteritidis + +

Shigella flexneri - -

Proteus aeruginosa - -

 Sulfuro Indol Motilidad (SIM):

Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la tripteína, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehído del reactivo de Kovac´s o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas móviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la punción de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2 (CES, 2008).

 Las reacciones correspondientes son (fig. 2):

1. Cepas móviles: producen turbidez del medio, que se extiende más allá de la línea de siembra.

2. Cepas inmóviles: el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra.

3. Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio.

4. Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.

5. Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac´s o de Erlich.

6. Cepas indol negativas: sin cambio de color.

Figura 2. Reacciones SIM

 Composición:

Compuesto Cantidad (gr)

Digerido pancreático de caseína 20

Digerido peptídico de tejido animal 6.1

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