Estudiante De La Salud

TECNICAS DE SIEMBRA BACTERIANA

UBICUIDAD Y TRANSMISIÓN DE MICROORGANISMOS

Al finalizar el laboratorio los alumnos serán capaces de:

 Realizar diversas técnicas de siembra

 Determinar la técnica más adecuada para realizar en diferentes medios de cultivo

 Demostrar la presencia de microorganismos en el medio ambiente y sobre nuestro cuerpo

 Reconocer vías de transmisión de microorganismos frecuentes en la práctica profesional

Las técnicas de siembra se pueden dividir desde el punto de vista práctico en tres tipos:

 Inoculaciones o siembras

 Aislamiento

 Recuentos

El asa de inoculación es una importante herramienta en el manejo de los microorganismos. Se esteriliza en la llama del mechero en forma perpendicular a la llama del mechero y desde el extremo proximal al distal.

I. Técnicas de inoculación o siembra: Las técnicas de inoculación son aquellas cuya finalidad es depositar una parte de la muestra que se desea estudiar sobre el medio de cultivo para obtener un crecimiento visible en forma de colonias. Estas pueden realizarse en medios líquidos, sólidos o semisólidos.

En medio líquido la siembra se realiza en tubo, utilizando asas de siembra, tórulas estériles o pipetas. La siembra puede realizarse a partir de distintos tipos de muestra:

 a partir de una colonia (asa de platino)

 a partir de una suspensión bacteriana (asa de platino o de siembra, tórula, pipeta)

 a partir de una muestra biológica (tórula)

En medio sólido se puede sembrar en placa, haciendo una inoculación total (toda la superficie de la placa) o parcial. Además se puede sembrar en tubo con medio inclinado (slant) o con medio recto.

 La inoculación parcial en placa puede realizarse con asa o con tórula

 La inoculación total en placa se puede realizar con tórula, por inundación, con asa de Drigalsky o por contacto.

 En tubo inclinado puede sembrarse por picadura en profundidad o por estría en superficie inclinada

 En tubo recto por picadura en profundidad

En medio semisólido se siembra en tubo por picadura en profundidad

II. Técnicas de aislamiento

El objetivo de las técnicas de aislamiento es procurar la separación necesaria de las colonias

bacterianas sobre la superficie del medio de cultivo para que éstas puedan ser procesadas individualmente. La técnica más utilizada para la aislación de microorganismos o cepas en cultivos mixtos es el estriado en placas Petri.

Esto consiste en rayar la superficie de una placa Petri con medio utilizando el asa de inocular impregnada con el cultivo a estudiar. Existen varios tipos de rallados como es el de cuadrante, el radiante, en forma de T y el continuo. El más utilizado entre estos es el de cuadrante.

III. Recuentos celulares bacterianos

Los recuentos bacterianos se efectúan para hacer un recuento del número de microorganismos que hay presentes en una muestra líquida. Los recuentos cuantitativos no se pueden efectuar sobre muestras no fluidas.

A. En medio líquido

 Turbidimetría: Escala de MacFarland

 Cámaras de recuento

B. En medio sólido

 Mediante asa calibrada

 Mediante diluciones seriadas

Cultivos Bacterianos

Cultivo: poblaciones bacterianas con millones de individuos. Cada colonia corresponde a la división sucesiva de una célula bacteriana o cepa en 18 a 24 hrs (bacterias aeróbicas o anaeróbicas facultativas)

Cultivo puro o axénico: el que contiene una sola clase de microorganismo.

Cultivo mixto o polimicrobiano: el que contiene varios microorganismos creciendo juntos.

Pasos para realizar frotis siembra o transferencias entre dos medios de cultivos (tubo con cultivo bacteriano a la placa):

Técnica para realizar una siembra

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