Extracción de lípidos Técnica de Folch

Extracción de lípidos

Técnica de Folch

Preparación Equipo

1. Por seguridad y para evitar errores limpiar perfectamente la balanza analítica.
2. Se preparan los solventes para la extracción. (BHT, Cloroformo, KCl al 0.88%, Cloroformo metanol)
3. Preparación de solventes:

1. Cloroformo metanol BHT 2:1 al 0.1%

1. 666 ml de Cloroformo (triclorometano) más 334 ml de metanol (ambos grado reactivo) más 0.01 gr de BHT (2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol).

1. Cloroformo metanol 2:1

1. 666 ml de Cloroformo (triclorometano) más 334 ml de metanol (ambos grado reactivo)

1. Solución de Cloruro de potasio al 0.88%

1. Se pesan 2.2 gramos de KCl (grado reactivo) y se diluyen en 250 ml de agua destilada.

1. Material de cristalería como embudos, tubos de ensaye, vasos de precipitado
2. Se elabora una etiqueta preferentemente con lápiz, o en su defecto tinta, no marcadores, porque se despintan.
3. Las muestras siempre se deben preparar por triplicado.

Pesaje

1. Se pesaran el posatubos (PT),  el tubo  de ensaye (Tu) y la muestra

1. Se pesa el portatubos (PT) se registra el peso,
2. luego el PT con el tubo (Tu) se registra el peso,
3.  y al final la muestra, esta no debe exceder a los 200 (0.2000) mg y lo mínimo debe ser entre 50 (0.0500gr) y 100 (0.1000 gr) mg.

Preparación de la muestra

1. Una vez agregada la muestra se lava lo que quedó en las paredes con 5ml  de BHT, siempre es esta cantidad y esto se mide en la probetas de 10 ml, para mayor precisión
2. Antes de iniciar con la agitación del ultraturrax, hay que limpiarlo con cloroformo solo, en un tubo de ensaye.

Extracción de lípidos

1. El tubo con la muestra se agita durante 4 minutos a 10 mil rpm en un vaso de precipitados con hielo, para mantener siempre una temperatura menor a los 36°C.
2. Al termino de los 4 minutos se miden otros 5 ml de cloroformo metanol y ayudados de una pipeta Pasteur se enjuaga el turrax para limpiar la muestra que se haya quedado en el aparato.
3. Después se agregan 2 ml de KCl al 0.88%.
4. Se mete a centrifugar por 12 min a 1500 rpm con un tubo de ensaye con igual volumen que la muestra pero de cloroformo para equilibrar.
5. Mientras se centrifuga se prepara un embudo de cristal con un papel filtro adhiriéndolo a las paredes del embudo con cloroformo y poniendo en el fondo un poco de sultafo de sodio anhidro (NH2SO4) en polvo para absorber humedad.
6. Después de la centrifugación se toma el precipitado con una pipeta Pasteur, estas siempre son nuevas y se pasa a través del filtro pero despacio, gota a gota si el embudo toca el fondo del tubo de ensaye, se limpia con más cloroformo.
7. Posteriormente a la muestra se le va a sellar con Nitrógeno durante 10 segundos aproximadamente, este debe ser con poca presión para no derramar la muestra y luego se pone un poco de parafilm y la tapadera, y se mete a congelar por 24 horas, para que los lípidos se separen.
8. Luego de pasadas las 24 horas se pasan al equipo de extracción de cloroformo, donde se dejan con un fluido constante de gas Nitrógeno hasta la evaporación del cloroformo.
9. Posteriormente se dejan en el desecador para terminar de sacar la humedad por espacio de 2 horas,  para luego pesarse y hacer los cálculos correspondientes.

Peso seco  

Evaluación de métodos de extracción de aceite de microalgas para la producción de biodiesel

1. Un portaobjeto seco y limpio se pesa y registra el peso.
2. Posteriormente se toma un poco de muestra en fresco y se pesa, registrando el peso de la muestra más el peso del portaobjeto.
3. Se mete a secar a la estufa a una temperatura de 40°C por espacio de 24 horas
4. Al término de este tiempo se mete al desecador por 2 horas aproximadamente y  después de este tiempo se pesa y registra el peso.
5. Para los cálculos correspondientes  se resta el peso del portaobjetos con la muestra seca al peso del portaobjetos con la muestra húmeda.

Determinación de proteínas por el método de Bradford

El método de Bradford para la determinación de proteínas implica la unión del tinte (Coomasie Brilliant Blue G-250). Coomasie Azul Brillante G-250 a las proteínas. El método de Bradford se lleva a cabo con cantidades específicas para microplatos.

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