Formulación de medios de cultivo alternativos para el crecimiento de bacterias y hongos

Formulación de medios de cultivo alternativos para el crecimiento de bacterias y hongos

1. Resumen:

1.1 Introducción

Los estudios microbiológicos se centran en la capacidad de cultivar y mantener los microorganismos en condiciones favorables para su desarrollo, donde comúnmente se utiliza el agar como medio de cultivo. Sin embargo, para el cultivo de hongos se utiliza PDA (infusión de papa, dextrosa y agar); ambos medios de cultivo son caros dificultando así el desarrollo de investigaciones microbianas.

Por lo que el objetivo de esta investigación es proponer medios de cultivo alternativos de bajo costo y disponibles, pero igual de efectivos al momento de cultivar microorganismos; como lo son los cereales y fuentes de proteínas.

1. Materiales y Métodos

1. Colección de muestras

Las muestras de nutrientes alternativos probados fueron siete y son: el arroz (Oryza sativa), el garbanzo (Cicer arietinum), el maíz (Zea mays), Dhal (Lens cullinaris), Thinai (Setaria italica), Harina de soja natural y Harina de soja procesada (TVP) (Glycine max); todos fueron comprados en tiendas locales e identificados y confirmados por un taxonomista en el Departamento de Botánica, Universidad de Jaffna.

1. Formulación de medios sólidos

Todas las muestras se molieron completamente en polvo fino mediante una batidora eléctrica (National), posteriormente se tamizó. Luego, las muestras en polvo se mantuvieron en recipientes herméticos hasta su uso. Se prepararon siete medios sólidos diferentes tomándose una cantidad específica de muestra de cada uno (3 g)  y se mezcló con (0.5 - 4 g) de agar (HIMEDIA).

Se descubrieron así los tiempos de solidificación de las siete muestras de nutrientes alternativos. Según los resultados finalmente se decidió utilizar 1 g de agar disuelto en 100 ml de agua destilada con 3 g de cada muestra en polvo.

En todos los experimentos, se midió el pH de los medios y se ajustó a 7 ± 0,2. Los medios disueltos fueron esterilizado por autoclave a 121°C por 20 minutos bajo la presión de 15 lbs / inch2.

1. Preparación de cultivos

• Bacterias: Las muestras bacterianas analizadas son E. coli, Pseudomonas sp., Bacillus sp., Staphylococcus sp. y Klebsiella sp, y fueron recolectados de la colección de cultivos bacterianos del Departamento de Botánica de la Universidad de Jaffna. Los cultivos se dejaron incubar a 37 ° C durante 24 horas.
• Hongos: En este estudio se analizaron cinco hongos diferentes, Trichoderma sp., Aspergillus sp., Penicillium sp., Sclerotium sp y Fusarium sp, y se obtuvieron de la colección de cultivos fúngicos del Departamento de Botánica de la Universidad de Jaffna. Los cultivos se incubaron a temperatura ambiente durante 2-3 días.

1. Inoculación microbiana en fuentes de medios alternativos

• Bacterias: A los cultivos de bacterias mencionadas anteriormente se les realizó una dilución en serie se realizó de acuerdo con el método estándar para obtener una bacteria final concentración de inóculo de 1.0 × 108 célula / ml. Se tomaron 0,1 ml de suspensión bacteriana usando una pipeta estéril, se inoculó en el centro de medios sólidos en condiciones estériles y se extendió uniformemente mediante un esparcidor de vidrio estéril. Las mismas bacterias se inocularon por triplicado en cada medio de cultivo alternativo, se incubaron a 370 ° C durante 48 horas. Después de la incubación, se observaron todas las placas en busca de crecimiento bacteriano y se contó el número de colonias en las placas por triplicado.
• Hongos: Se utilizaron los cultivos de hongos mencionados anteriormente; luego se cortó un disco fúngico utilizando un taladro de corcho estéril de 8 mm y se colocó en la superficie de cada medio de cultivo de nutrientes alternativo en réplicas. Los hongos probados también se introdujeron en medios PDA que sirvió como control. Luego, todas las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 2-3 días. Después de la incubación, el diámetro del micelio fúngico se midió usando una regla en 3 direcciones y luego se calculó el diámetro promedio para cada hongo.

1. Análisis estadístico de datos

Todos los datos fueron analizados estadísticamente por el software STATISTICA (p <0.05).

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