Fotocolorimetría
Enviado por lauracatteau • 24 de Enero de 2015 • 903 Palabras (4 Páginas) • 334 Visitas
DIAGRAMA DE FLUJO
Manejo del fotocolorímetro: Los siguientes pasos deben realizarse cada vez que vaya a tomarse una lectura a una longitud de onda diferente:
Seleccionarse la longitud de onda.
Ajustar el cero en transmitancia.
Preparar solución de 2 ml de reactivo Biuret y 2 ml de agua destilada (solución blanco) y colocar en la celda.
Ajustar el cero de absorbancia.
Colocar el tubo con solución problema.
Leer la absorbancia.
B. Determinación del espectro de absorción de un complejo.
Colocar la longitud de onda 420 nm en el instrumento.
Preparar una solución de un ml de albúmina con 1 mm de reactivo Biuret.
Asegurarse que las soluciones no tenga burbujas y que el recipiente tenga su superficie limpia.
Calibrar el instrumento como se explicó anteriormente.
Coloque el tubo con la solución problema en el instrumento y anote la absorbancia.
Repetir aumentando la longitud de onda de 20 en 20 nm hasta alcanzar los 620 nm.
Curva de calibración para soluciones de albúmina: Hacer 9 soluciones como indica la siguiente tabla y agregar posteriormente a cada tubo 4 ml de reactivo Biuret. A cada solución medir su absorbancia como se indicó en los literales anteriores con la longitud de onda de la máxima absorbancia obtenida en el literal B.
Tubo
Blanco
1
2
3
4
5
6
7
8
Solución patrón (ml)
0.1
0.3
0.5
0.7
0.9
1.2
Solución problema
0.5
1.0
Solución salina
2.0
1.9
1.7
1.5
1.3
1.1
0.8
Calcular la concentración de proteína en cada tubo aplicando la fórmula C1xV1=C2xV2.
RESULTADOS
Determinación del espectro de absorción de un complejo.
(nm)
Absorbancia
(nm)
Absorbancia
420
0.136
540
0.217
440
0.121
560
0.211
460
0.136
580
0.183
480
0.156
600
0.160
500
0.177
620
0.119
520
0.203
Curva de calibración para soluciones de albúmina: Hacer 9 soluciones como indica la siguiente tabla y agregar posteriormente a cada tubo 4 ml de reactivo Biuret. A cada solución medir su absorbancia como se indicó en los literales anteriores.
Tubo
Blanco
1
2
3
4
5
6
7
8
Solución patrón (ml) con concentración 1 g/ml
0.1
0.3
0.5
0.7
0.9
1.2
Solución problema
0.5
1.0
Solución salina
2.0
1.9
1.7
1.5
1.3
1.1
0.8
Absorbancia
-0,035
0,101
-0,030
0,502
0,440
0,096
0,003
0,027
Concentración
0,95
0,85
0,75
0,65
0,55
0,40
GRÁFICAS
Determinación del espectro de absorción de un complejo.
Gráfica 1: Espectro de absorción de la albúmina.
Curva de calibración para soluciones de albúmina
Grafica 2: concentración vs absorbancia
DISCUSIÓN
A partir del análisis
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