Fraccionamiento

FRACCIONAMIENTO DE TEJIDOS ANIMALES.

1. OBJETIVOS:

• Emplear solucionas diferenciales y métodos de centrifugación para el fraccionamiento de un tejido animal en sus principales compuestos constitutivos.

• Caracterización de las biomoléculas constitutivas de los tejidos de acuerdo a sus propiedades químicas.

• Cuantificación de las biomoléculas constitutivas de los tejidos por gravimetría.

• Comparar los diferentes tejidos desde el punto de vista de sus componentes principales.

2. INTRODUCCIÓN.

Debido a las diferencias químicas que existen entre las moléculas, carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucléicos, estos presentan diferente solubilidad en ácido tipo tricloroacético (ATA), según temperatura y en solventes orgánicos ; luego es posible utilizar estas características para descomponer los tejidos y separa dichos biocompuestos toda vez que han sido triturados y se han roto sus membranas celulares.

El ácido tricloroacético (ATC) (Cl3CCOOH) a baja temperatura, actúa de diferente forma sobre cada biocompuesto. Sobre Carbohidratos, a baja temperatura los monosacáridos son estables en medio ácido, mientras que en caliente, sufren deshidratación produciéndose frutales. Los polisacáridos en medio ácido sufren hidrólisis del enlace glucosídico, reacción que aumenta su velocidad a medida que se eleva la temperatura. A temeperaturas inferiores a 4°C su velocidad es tan lenta que para fines prácticos se considera que no ocurre. En general se dice que los carbohidratos son solubles en solución de ATA al 20% a temperaturas inferiores a 4°C y que no sufren cambios químicos en estas condiciones.

Sobre lípidos: Por definición éstos compuestos son poco solubles en soluciones acuosas, por lo tanto no se extraen si se trata el tejido con soluciones acuosas de ATC.

Sobre proteínas: Estas forman sales insolubles en ácidos como el ATC y el perclórico y por tanto no son solubles en soluciones de ATC al 20% en frío.

Sobre los ácidos nucléicos: Al igual que las proteínas, éstos ácidos son insolubles en soluciones frías de ATC. Además el DNA se encuentra unido a proteínas como las histonas, lo cual lo hace mas insoluble en estas condiciones.

En conclusión, al tratar un tejido animal previamente triturado con ATC al 20% y a 4°C y someter a centrifugación la suspensión resultante, en el sobrenadante se separan los azúcares, mientras que los lípidos, proteínas y ácidos nucleícos quedan en el residuo.

...