Fundamentos de biología

Practica 4 Fundamentos de biología

Extracción de ADN animal y vegetal.

FUNDAMENTO:

1º.- La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas: En primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas

Emulsionan los lípidos de las membranas celulares y las rompen.

2º.- La sal evita la unión de las proteínas al ADN.

3º.- Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El

ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.

Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución. (Completar introducción)

Materiales

1.- Hígado de pollo y papaya

2.- Agua destilada o mineral

3.- Sal de mesa

4.- Detergente lavavajillas

5.- Alcohol de 96 º muy frío

6.- Varilla de vidrio

7.-. Tubo de ensayo

8.- Batidora y un cuchillo.

PROCEDIMIENTO: Papaya.

1.- En el vaso de precipitado pequeño echa 3 cucharaditas de detergente lavavajillas.

2.- Añade una cucharada de sal.

3.- Añade 25 mililitros de agua destilada.

4.- Mantener en un baño de hielo esta disolución.

5.- Corta la zona central del vegetal elegido en cuadrados.

6.- Tritura los trozos del vegetal (en el vaso de precipitado grande) con un poco de agua en la batidora (la mezcla de células y agua debe ser opaca), accionando 2 veces las cuchillas a impulsos de 10 segundos. Así se romperán muchas células

7.- Mezcla en el recipiente grande el triturado celular con la disolución inicial del vaso.

8.- Agita vigorosamente la mezcla durante al menos 5 minutos, sin formar espuma.

9.- Haz pasar el líquido obtenido por un colador.

10.- Retira 5 ml. de la mezcla a un tubo de ensayo y añade con la pipeta 5 mililitros de alcohol enfriado a 0º C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del tubo de ensayo, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre la mezcla.

11.- Deja reposar durante 5 minutos hasta que se forme una zona turbia entre las 2 capas. (Mientras esperas este tiempo, puedes ir recogiendo y limpiando todos los recipientes empleados anteriormente).

12.- Introduce una varilla justo debajo del alcohol (la zona turbia que queda entre las 2 capas). Remueve la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN.

13.- Pasado un minuto, retira la varilla atravesando la capa de alcohol, con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo, con el aspecto de un copo

...