HPLC – Determinación de cafeína

2do Cuatrimestre 2016.

HPLC – Determinación de cafeína.

Columna:  BDS Hypersil C18 (250x4,6 mm, 5um tamaño de partícula)

Solvente: Ácido acético 4%: Metanol, 65:35, v/v.

Flujo: 1ml/min.

Deteccion: 254 nm.

Consideraciones a tener en cuenta:

Presión de la bomba con Metanol 100%: aprox. 98 Bar

Presion de la bomba con la fase móvil: aprox. 189-190 Bar

El detector se fija a 254 nm (Otros parámetros son Rise time 0,1 (sec); Range 0,01 (AUFS) que en general no deben tocarse)

El programa de la compu es el PeakSimple. Tengan especial cuidado en que siempre este marcado el Channel 2. La adquisición de datos no comienza automáticamente, hay que hacerlo manualmente, de ahí las posibles diferencias de los tiempos de retención que me dieron.

Soluciones patrón de cafeína de 1mg/ml: 0,75mg/ml y 0,5 mg/ml. (Solvente metanol)

Muestra de Cunnington Cola-Zero (es directamente la gaseosa sonicada hasta que se queda sin burbujas)

[pic 1]

Les paso los cromatogramas que obtuve hoy. Igual quedaron todos guardados en la carpeta Biologos 2C 2016.

 Cafeina Patron 1mg/ml

[pic 2]

Cafeina Patròn 0,75 mg/ml

[pic 3]

Cafeina Patron 0,5 mg/ml

[pic 4]

Cunnington – Muestra sin diluir

[pic 5]

Curva de calibración

[pic 6]

Concentración de Cafeína en la gaseosa: 0,053 mg/ml

(Habría que hacer más diluciones aunque la muestra puede que esté un poco vieja también)

HPLC

Cafeína de café

Columna:

 Marca ThermoHypersil-Keystone.

Descripción: BDS HYPERSIL C18. Dimensiones (mm) 250 x 4,6. Tamaño de partícula 5 µm.

Condiciones cromatográficas:

Fase móvil: Metanol + Acido acético 4 % (35:65)        

Caudal: 1.0 ml/min

Volumen de inyección: 10 µl

Presión: 206-210 Bar

Longitud de onda de detección: 254 nm

[pic 7]

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