INTRODUCCION A LA HISTOLOGIA

ETIMOLOGICAMENTE HISTOLOGIA SIGNIFICA ESTUDIO DE LOS TEJIDOS1.1. INTRODUCCION

La Histología incluye el estudio de las células, los tejidos, los componentes extracelulares y los órganos.

Los métodos para la obtención de preparaciones histológicas que serán ocupadas en los estudios de microscopia óptica, se engloban en la Técnica Histológica.

La Técnica Histológica abarca varios procedimientos a los que se somete un tejido para proporcionar los cortes histológicos a estudiar, montados en portaobjeto y bajo un cubre objeto con imágenes de estructuras contrastadas, para su estudio en el microscopio. Los pasos de la Técnica Histológica son los siguientes:

1.1.1. OBTENCION DE LA MUESTRA

Para su estudio, estas se pueden dividir en:

 Muestras liquidas

 Muestras de humores, secreciones.

 Muestras solidas

 Muestras de tejidos u órganos

• Necropsia: Examen u obtención de tejido de un organismo muerto.

• Biopsia: examen u obtención del tejido de un organismo vivo.

Se utilizan diversas técnicas para la obtención de la muestra como ser: inscinsional, exsicional por sacabocados, por punción, absorción y raspado.

1.1.2. FIJACIÓN

Este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas que tienen varias finalidades:

 Conservar los tejidos

 Aumentar la dureza del tejido para facilitar el corte, la preparación de finas película.

 Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos.

 No cambian significativamente de forma y/o volumen.

 Los tejidos fijados permiten una correcta y clara tinción de los mismos.

 Los tejidos fijados deben en lo posible mantener las mismas características de los tejidos vivos, por lo tanto, los fijadores mantiene la estructura celular con la menor variación posible.

 Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren a la muerte de la célula.

Esto se logra al inactivar ciertas enzimas celulares que de otra manera iniciarían la Autolisis y llevarían a la degeneración post mortem.

Los agentes fijadores más utilizados son:

 Formaldehido al 5%.

 Formol al 10% o Formalina.

 Glutaraldehído al 2.5%.

 MALA FIJACION

Estas son dos imágenes de un preparado histológico del extremo de una vellosidad intestinal. Ambos preparados fueron procesados mediante todos los pasos de la Técnica histológica para microscopía óptica. Sin embargo, una de las muestras fue mal fijada.

MAL FIJADO CORRECTAMENTE FIJADO

La AUTOLISIS o AUTODIGESTION es el proceso que se desencadena en la célula desde el momento que deja de recibir un normal aporte de oxígeno o de nutrientes. La muerte celular produce la autolisis y la total alteración de las características estructurales de la célula.

¿Por que ocurre la autolisis?

La falta de oxígeno y de nutrientes interrumpe la producción de ATP (molécula energética). En la membrana plasmática de la célula existen una serie de proteínas que activamente (con gasto de ATP) mantienen las concentraciones iónicas normales dentro de la célula. La falta de ATP detiene el funcionamiento de estas proteínas lo que produce la entrada anormal de iones principalmente sodio, cloro y calcio. El sodio y el cloro atraen agua que a su vez produce un edema en la célula. El calcio activa una serie de enzimas intracelulares (fosfolipasas) que perforan las membranas de las organelas. Dentro del conjunto de organelas la destrucción de las membranas de los lisosomas produce la mayor alteración de la célula. Los lisosomas son vesículas delimitadas por membrana plasmática que contiene enzimas hidrolíticas: fosfatasa ácida, ribonucleasa, proteasa, sulfatasa, lipasa, glucuronidasa. Todas estas enzimas digieren proteínas, lípidos, ácidos nucleicos, etc. La liberación anormal de estas enzimas dentro de la propia célula degrada su citoesqueleto y sus organelas. Por lo tanto la fijación de los tejidos debe ser sumamente rápida para evitar el comienzo de todos estos cambios post mortem.

1.1.3. DESHIDRATACIÓN

Para comprender los siguientes pasos debemos saber que nuestro fin es preparar una muy fina rebanada de tejido para colocar arriba de un portaobjetos y observarla en un MO. Debe ser una fina capa de tejido para que la luz del microscopio la atraviese y observemos bien los detalles. Antes de cortar el tejido el mismo debe ser incluido en un medio rígido que me permita hacer cortes muy finos (5 a 15 µm).

El medio de inclusión utilizado en forma rutinaria es la parafina. Por lo tanto, ahora debemos hacer que la parafina se introduzca dentro de la muestra fijada. La muestra hasta ahora se halla en el fijador acuoso y la parafina no es soluble en agua, por lo que la muestra debe ser deshidratada

Se elimina el fijador y se extra el agua del tejido. Para evitar un cambio de volumen brusco por la deshidratación (distorsión del tejido), se aplica una serie gradual de soluciones de alcohol de menor a mayor concentración, por ejemplo: iniciando con alcohol al 50 %, luego con una solución de 60%, 70%, 80%, 90%, y alcanzando de manera paulatina el alcohol al 100 % para lograr la deshidratación del tejido.

DESHIDRATACIÓN

Desde el fijador (a la izquierda) la muestra es colocada sucesivamente en concentraciones crecientes de alcohol.

1.1.4. ACLARAMIENTO

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