Informe de laboratorio. Los carotenoides son compuestos naturales presentes en diversas estructuras de plantas

INTRODUCCIÓN

Los carotenoides son compuestos naturales presentes en diversas estructuras de plantas y en gran variedad de animales, algas, hongos y bacterias. Estos pigmentos son responsables del color de flores y frutos (para favorecer la polinización y dispersión de semillas), o de estructuras animales como las plumas y picos de algunos pájaros, el exoesqueleto de crustáceos y el músculo o la piel de algunos peces.

Los carotenoides son tetra terpenos constituidos por múltiples unidades isoprenoides con un anillo de ciclohexano sustituido e insaturado en cada uno de los extremos. Son moléculas lipofilicas, con nula solubilidad en agua. La propiedad de absorber luz se deriva de la presencia de 7 o más enlaces dobles conjugados con posibilidad de absorber luz visible, con colores que van del amarillo al rojo.

La cromatografía comprende un conjunto de técnicas que tienen como finalidad la separación de mezclas basándose en la diferente capacidad de interacción de cada componente en otra sustancia. De forma general, consiste en pasar una fase móvil a través de una fase estacionaria fija sólida. La fase estacionaria retrasa el paso de los componentes de la muestra, de forma que los componentes la atraviesan a diferentes velocidades y se separan en el tiempo.

En este Laboratorio se intentó aislar los pigmentos presentes en el Ají de color, la mayoría de estos pigmentos corresponden a carotenos, los cuales se separaron por medio de dos técnicas, primero se usó cromatografía en columna, usando sílice como fase estacionaria y diclorometano como fase móvil, y luego se utilizó la técnica de cromatografía en capa fina. Finalmente, cuando ya obtuvieron los compuestos purificados se reconocieron mediante sus espectros UV-visibles característicos.

METODOLOGÍA

Materiales

Procedimiento

1. Se llenaron aproximadamente tres cuartos del largo  total de la columna, con sílice, esto para estimar la cantidad que se debe agregar.
2. Se disolvió el gel de sílice en un vaso precipitado con diclorometano
3. Se agregó esta mezcla a la bureta con la ayuda de un embudo y se abrió la llave para quitar el exceso de diclorometano, hasta que quedase aproximadamente 0.5 cm sobre el nivel del gel sílice.
4. Se masaron 0,3 gr de ají de color comercial y se disolvió en una pequeña cantidad de diclorometano.
5. Con extremo cuidado y la ayuda de un gotario, se fue agregando esta última mezcla a la columna cuidando que no se dispersara durante la aplicación.
6. Luego con cuidado se colocó una mota de algodón sobre la muestra de ají color que se agregó a la columna
7. Se dispuso de un vaso precipitado bajo la columna para verter ahí el contenido
8. Aquí comenzó la separación cromatográfica, la primera corrida diclorometano fue con una concentración del 2% de metanol, se extrajo en un vaso precipitado y se puso en los tubos de ensayo.
9. La Segunda  corrida fue diclorometano con una concentración de 5% de metanol, se repitió el procedimiento del punto 8.
10. La tercera corrida fue de Metanol y también se colocó en los tubos de ensayo.

11.- Una vez recolectados los tubos se guardaron y días después cuando ya se había evaporado el diclorometano y el metanol, se les disolvió en una pequeña cantidad de diclorometano en nueve  de los tubos.

12.- Se preparó una placa oblonga de aluminio con una pequeña capa de sílice en su superficie, a la cual se le trazó una línea en su extremo dejando un margo de aproximadamente 0.5 cm, (la línea se trazó transversalmente a su eje más largo).

13.- Luego se prepararon dos placas más.

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