Laboratorio Química Orgánica I.

Universidad Mariano Gálvez [pic 1]

Instituto de investigaciones Químicas, Biológicas, Biomédicas y Biofísicas

Laboratorio Química Orgánica I

Instructora: Licenciada Odette de Bocalleti

Práctica #2

Extracción e identificación de pigmentos vegetales y desmetalización de clorofilas:

Jorge Federico Nave Freire

Carnet: 1009-15-584

Fecha de realización: 03/02/2016

Fecha de entrega: 10/02/2016

1. Sumario:

La presente práctica tuvo como objetivo principal la extracción de pigmentos vegetales presentes en hojas de espinaca, la desmetalización de clorofilas y el cálculo de Rf de los pigmentos. Para lo cual se maceraron hojas de espinaca en un mortero, obteniéndose una pasta, a la que se le agregó acetona y se trasvaso a un tubo de ensayo, donde se agregó hexano para completar la extracción de pigmentos. Se centrifugó el tubo de ensayo para separar el sobrenadante con los pigmentos de la parte sólida. Luego se armó la fase móvil de la cromatografía, con una mezcla de solventes orgánicos (60% Eter de petróleo, 16% ciclohexano, 10% Acetato de etilo, 10% Acetona y 4% Metanol) en un beaker, posteriormente se armó la fase estacionaria con la placa de TLC, a la cual se le realizaron marcas con lápiz a medio centímetro de cada extremo. Por último se utilizó un capilar para dispensar la mezcla de pigmentos sobre la placa de TLC y se colocó la placa en la fase móvil, para el corrimiento de los pigmentos, calculando el Rf de cada pigmento. Se repitió la cromatografía con clorofilas desmetalizadas por la acción de una resina de intercambio iónico y se calculo el Rf de las feofitinas a y b. Fue posible completar la extracción y cromatografía TLC de los pigmentos presentes en hojas de espinaca así como calcular el Rf de cada uno. Los resultados obtenidos fueron muy consistentes con la teoría, sin embargo pudieron existir diversas fuentes de error como el mal posicionamiento de la placa en la cámara cromatográfica, error humano al dispensar los pigmentos sobre la placa o un corrimiento excesivo de los pigmentos durante la fase móvil.

1. Resultados:

Tabla #1: Corrimiento cromatográfico TLC de pigmentos presentes en espinaca

Fuente: Datos experimentales

Tabla #2: Corrimiento cromatográfico TLC de feofitinas presentes en espinaca

Fuente: Datos experimentales

1. Discusión de resultados:

En la trabla #1, se muestran los resultados de la cromatografía TLC de los pigmentos vegetales presentes en las hojas de espinaca, para extraer dichos pigmentos fue necesario macerar las hojas y agregar a la pasta obtenida dos solventes orgánicos de diferente polaridad; la acetona de polaridad intermedia y el hexano apolar.

La acetona al ser un solvente orgánico de polaridad intermedia permite la extracción de los pigmentos polares, entre ellos la clorofila a, clorofila b y las xantofilas. Para los carotenos, al ser hidrocarburos apolares se utiliza un solvente orgánico apolar, que en este caso fue el hexano. Es importante utilizar solventes orgánicos, ya que los pigmentos vegetales presentan afinidad química por estos, permitiendo que los solventes polares atraigan pigmentos polares y solventes apolares a pigmentos apolares (González, 2002).

Durante la cromatografía se utilizó como fase móvil una mezcla de solventes orgánicos 76% apolar (60% Eter de petróleo, 16% ciclohexano, 10% Acetato de etilo, 10% Acetona y 4% Metanol) y una fase estacionaria constituida por las placas de TLC, las cuales contienen sílica gel y alúmina, ambas de naturaleza polar.

Para una mejor separación de pigmentos es necesario que la fase móvil sea una mezcla de solventes orgánicos apolares con una pequeña porción polar. La porción apolar permite el corrimiento de los pigmentos apolares; carotenos. Mientras que la parte polar permite el corrimiento de los pigmentos polares (xantofilas y clorofilas), además ayuda a la separación de las clorofilas a y b, que cuentan con una estructura química similar, siendo su única diferencia la presencia de un grupo metilo (CH3) en la clorofila a y un grupo aldehído (HC=O) en la clorofila b lo que hace a esta última mas polar, mientras más oxigeno posea el pigmento más polar será.

La fase estacionaria por ser polar, tienen más afinidad por los pigmentos polares, provocando su adsorción en la placa, mientras que los pigmentos apolares migran con mayor facilidad al no quedar retenidos (Lallana & Lallana, 2003) (Tecnológico de Monterrey).

Ya realizado el corrimiento en la placa de TLC, se procedió a calcular los Rf de cada pigmento, como se aprecia en la tabla #1. Comprobando que el pigmento más apolar fue el beta-caroteno de color naranja, el cual tuvo una mayor migración y por lo tanto un mayor Rf (0.89), le siguió la clorofila a de color azul verdoso con un Rf de 0.47, posteriormente la clorofila b de color verde oliva con un Rf de 0.42 y por último los más polares, las xantofilas de color amarillo con un Rf de 0.24. Al comparar estos datos experimentales con datos reportados en otros estudios semejantes, se aprecia una gran similitud entre los Rf obtenidos durante esta práctica y los reportados por la literatura (ver tabla de Rf en apéndice).

...