Las bacterias Gram

DISCUSIÓN

Al realizar la tinción Gram pudimos reconocer el grupo al que pertenecen las tres bacterias en estudio, clasificando como Gram positivas a las que presentan una coloración final violeta observadas en el microscopio y Gram negativas a las que presentan coloración final rojiza.

En el caso de Bacillus cereus y de Staphylococcus aureus la coloración final resultó siendo violeta, es decir, el primer colorante que se agregó a la muestra prevaleció frente a la deshidratación con alcohol-acetona. Por otro lado, Escherichia coli se observó de color rojo. Según la clasificación de Bergey para Bacteria, Bacillus cereus y Staphylococcus aureus pertenencen a la división de bacterias Gram Positivas mientras que Escherichia coli pertenece al de  Gram Negativas.

Las bacterias Gram Positivas y Gram Negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. 

La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano (mureína). La pared de la célula Gram Positiva es gruesa y consiste en varias capas (hasta 25 en algunos casos) interconectandas de peptidoglicano así como algo de ácidos teicoicos. Generalmente, el peptidoglicano puede alcanzar el 90% en la pared de Gram Positivas. Por otro lado, en Gram Negativas la pared de la célula contiene una capa mucho más delgada de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Solo alrededor de 10% de la pared de la célula es peptidoglicano.

En cuanto a la técnica, en un primer momento, al agregar el cristal violeta, todas las bacterias que han sido fijadas con calor a la lámina porta objetos se tiñen de violeta, por eso a este colorante se le considera el colorante primario y, tanto las bacterias Gram positivas como Gram negativas quedan teñidas de color violeta. Luego, el portaobjetos se cubre con una solución de yodo-yoduro potásico (I2-KI) o Lugol. El ingrediente activo es aquí el I2; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las células y forma un complejo con el cristal violeta insoluble en agua llamado Violeta-Yodo (I2-Cristal violeta), una molécula que por su tamaño no es fácilmente eliminado del citoplasma. De nuevo tanto las células grampositivas como las gramnegativas se encuentran en la misma situación: aparecen teñidas de violeta.

Por otro lado, en el siguiente paso, cuando se agrega el alcohol-acetona, sustancia en la que es soluble el complejo I2-cristal violeta, este alcohol-acetona hidroliza la capa de peptidoglucano. En el caso de las bacterias con varias capas, la hidrolisis no es total, por lo que el colorante primario aún se mantiene dentro de la célula, mientras que la bacteria con una capa muy delgada de peptidoglucano lo pierde totalmente dando lugar a que el colorante primario se pierda. La diferencia esencial entre esos dos tipos de células está por tanto en su resistencia a la decoloración; esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias Gram Negativas, la mezcla de alcohol-acetona es un solvente lipídico y disuelve la membrana exterior de la pared de la célula. La delgada capa de peptidoglucano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la célula se decolora. Las células Gram Positivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen más peptidoglucano y menos lípido), no son permeables al disolvente ya que éste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre las moléculas y provocando que el  complejo cristal violeta-I2 quede atrapado dentro de la pared celular.

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