Observacion De Bacterias Con Tincion Gram

OBSERVACION DE LOS MICROORGANISMOS

TINCION GRAM

Todos los microorganismos, excepto los virus, pueden ser observados mediante microscopios ópticos, por lo que nos vamos a limitar a describir las técnicas más comúnmente usadas para realizar preparaciones para microscopios ópticos.

Técnicas de tinción:

En general, el proceso seguido en todas las tinciones conlleva las siguientes etapas: extensión, fijación, tratamiento con colorantes y observación.

Preparación en fresco: para poder observar la movilidad de un microorganismo es preciso que no esté fijado. Consiste en suspender una gota, tomada directamente de la muestra, sobre un portaobjetos y cubriéndola, sin formar burbujas de aire con un cubreobjetos, se observa al microscopio de contraste de fases.

1.- Extensión: se realiza sobre un portaobjetos que ha de estar totalmente limpio. Si la muestra es líquida se hace directamente y, si es sólida, hay que resuspenderla previamente en una gota de H2O.

2.- Fijación: tiene por objeto adherir la muestra al portaobjetos y desnaturalizar las proteínas para facilitar la acción del colorante. Normalmente se realiza con calor, pasando la muestra repetidamente a 10 cm de la llama del mechero.

3.- Tinción: se realiza añadiendo los colorantes sobre los microorganismos sometidos a los procesos anteriores.

Tinción de Gram: Es la técnica de tinción diferencial más importante que se utiliza en bacterias. El primero en describirla fue el Danés Christian Gram. Consiste básicamente en añadir 4 colorantes cristal violeta, lugol, alcohol-acetona y safranina.

Esta tinción distingue entre dos amplios grupos de bacterias según la composición de la pared celular; las Gram (-) que no retienen el complejo cristal violeta-lugol después de la decoloración con alcohol y aparecen teñidas de rojo, y las Gram (+) que sí lo retienen y aparecen teñidas de azul oscuro.

OBJETIVO:

Identificar la morfología de las bacterias mediante la tinción Gram y su agrupación.

MATERIAL:

o Portaobjeto

o Cubreobjeto

o Cepas bacterianas de muestra

o Colorantes de la tinción Gram

o Asa de nicromo o platino

o Microscopio

o Piseta com água destilada

o Mechero o lámpara de alcohol

o Fósforos o encendedor

PREPARACION:

1.- Prepare frotis por la técnica de extensión y de fijación, utilice un hisopo/cotonete,

una asa de platino o nicromo y un picadiente.

2.- Utilice la tinción Gram para observar la morfología de los microorganismos

3.- Observe los frotis preparados con los diferentes objetivos

4.- Anote lo observado con cada objetivo

5.- Anote lo observado con cada utensilio de desplazamiento de la muestra

(hisopo/cotonete, asa y picadiente

6.- Anote el tipo de microorganismos encontrado en su muestra según la morfología y el Gram.

CUESTIONARIO:

1. ¿Qué otros colorantes se pueden utilizar para teñir microorganismos?

Los colorantes más utilizados son colorantes básicos, la parte que proporciona el color está cargada positivamente. Se utilizan estos colorantes porque las células bacterianas están débilmente cargadas en su superficie con cargas negativas. Los más utilizados son el Cristal Violeta, el Azul de Metileno y la Safranina.

La tinción primaria se realiza con Fuscina básica que tiñe las células de rojo. Tinción de esporas. La tinción primaria se realiza con Verde de Malaquita en caliente que tiñe las células de verde. La tinción de flagelos de Leifson es una tinción simple que usa un colorante, la rosanilina y ácido tánico que engrosa los flagelos para que puedan verse. Es imprescindible fijar las células con formol y realizar la tinción muy cuidadosamente para poder observar los flagelos. La mejor técnica para visualizar cápsulas se basa en realizar una tinción negativa utilizando tinta china o nigrosina, colorantes que no penetran en la célula sino que ennegrecen el medio.

Safranina, Verde de malaquita, Azul de metileno, Azul de algodón y Azul de lactofenol.

• Azul brillante de Coomassie

Coomassie blue (también conocido como azul brillante) es un colorante que tiñe en forma no específica a todas las proteínas con un fuerte color azul. Se utiliza frecuentemente para teñir las corridas de proteínas en las electroforesis en gel.

• Azul de metileno

Azul de metileno se utiliza para teñir células animales, para hacer más visibles sus núcleos. Es también utilizado para teñir los extendidos de sangre para ser utilizados en citología y como colorante vital en el recuento de reticulocitos.

• Azul Nilo

El Nile blue (o Nile blue A), es decir azul Nilo, tiñe a los núcleos de color azul. También puede ser utilizado para teñir células vivas.

• Bismarck brown

Bismarck brown, Marrón Bismarck, (también conocido como Bismarck brown Y o Manchester brown) le imparte un color amarillo a las mucinas ácidas. Se puede utilizar con células vivas.

• Bromuro de etidio

El bromuro de etidio (BE) se intercala en el ADN y le otorga un color rojo naranja fluorescente. A pesar de que no es capaz de teñir células vivas ya que no atraviesa las membranas intactas, puede ser utilizado para identificar células que se encuentran en las etapas finales de la apoptosis, ya que tales células poseen unas membranas mucho más permeables. Por el mismo motivo,

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