Las proteínas son sustancias nitrogenadas complejas

INTRODUCCIÓN

Las proteínas son sustancias nitrogenadas complejas, que constituyen los productos más característicos de los seres vivos; forman parte integral del protoplasma y núcleo de todas la células, y son componentes esenciales del plasma sanguíneo, presentando una actividad caracterizada por su alto grado de especificidad en el desempeño de las funciones primordiales para el mantenimiento de la vida, y por su composición química y estructura física, determinan y condicionan los aspectos morfológicos y metabólicos de los organismos vivientes.(Otero de la Gándara, 1950)

El plasma sanguíneo es una solución acuosa de electrolitos, nutrientes, metabolitos, proteínas, vitaminas, oligoelementos y compuestos con funciones de señalización. La fase líquida de la sangre coagulada se denomina suero. El suero se diferencia del plasma por la ausencia de fibrinógeno y otras proteínas que se consumieron durante la coagulación. (Koolman y Rohm, 2004)

El plasma sanguíneo contiene un 10 por ciento de soluto, de los cuales una gran parte son proteínas (7g/dl). El intervalo de la concentración de proteínas plasmáticas en los seres humanos adultos está comprendido entre 5,7 y 8 g/dl. La separación electroforética de las proteínas plasmáticas genera cinco fracciones principales: albúmina, que constituye el 54-58% del total de proteínas, -globulinas, con 6-7%, -globulinas, son el 8-9%, -globulinas, son el 13-14%, y -globulinas, que son el 11-12% del total de proteínas. (Garrido y Teijon, 2006)[pic 1][pic 2][pic 3][pic 4]

Para el estudio de la estructura de una proteína, es necesario conocer cuantitativamente la concentración de las proteínas. Se han desarrollado diversas técnicas que se basan en complejos coloridos entre las proteínas y reactivos específicos. (Segal y Ortega, 2005)

El método de biuret es la técnica más simple para la determinación de proteínas totales. Las sustancias que contienen dos o más enlaces peptídicos forman un complejo púrpura con sales de cobre (II) alcalinas. El desarrollo del color es diferente para cada proteína y su intensidad se puede determinar espectroscópicamente a 540 nm.(Herrera y Bolaños, 2003)

Para determinar la concentración de albúmina sérica se utiliza un colorímetro como el verde de bromocresol, este se une específicamente a la albúmina formando un complejo de albúmina-colorante, absorbiendo la luz a una longitud de onda diferente a la del colorante libre. (Macarulla y Goñi, 1994)

En la presente experiencia se cuantifican, utilizando los métodos colorimétricos combinados con el reactivo de Biuret y Verde de Bromocresol para determinar la cantidad de proteínas totales y albúmina, respectivamente.

CUANTIFICACIÓN DE LAS PROTEÍNAS

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES

Tabla N°3. Disposición de los reactivos para realizar la cuantificación de las proteínas totales

Calcular la cantidad de mg de proteínas que contiene cada patrón.

Para calcular los mg de las proteínas en los tubos del 1 al 4 se inicia del estándar de proteínas a concentración 8mg/ml, donde 8mg de proteínas se halla en 1 ml de solución, así el cálculo se efectúa mediante una simple regla de tres utilizando los ml de solución para cada uno de los tubos.

Tubo N0 1 estándar de proteínas: 0,25 ml Tubo     N0 2 estándar de proteínas 0,50 ml[pic 5][pic 6]

     8 mg de proteínas                                1ml             8 mg de proteínas                              1ml[pic 7][pic 8]

                             X                          0,25 ml                            X                                   0,50 ml[pic 9][pic 10]

          X =      8 mg proteínas x 0,25 =                         X =   8mg proteínas x 0,50    =[pic 11][pic 12]

                                     1 ml                                                           1 ml

                           X = 2 mg de proteínas                         X = 4 mg de proteínas

Tubo N0 3 estándar de proteínas: 0,75 ml              Tubo N0 4 estándar de proteínas: 1 ml[pic 13][pic 14]

     8 mg de proteínas                                   1ml           8 mg de proteínas                              1ml[pic 15][pic 16]

                               X                                  0,75 ml                             X                                1 ml[pic 17][pic 18]

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