METODO PARA LA CUENTA DE BACTERIAS ARODIAS EN PLACAS

1.4 METODO PARA LA CUENTA DE BACTERIAS ARODIAS EN PLACAS

Esta norma oficial Mexicana establece el método para es estimar la cantidad de microorganismos viables presentes en agua potable y agua purificada,  por la cuenta de colonias en un medio sólido, incubado aeróbicamente.

Fundamento

El fundamento de la técnica consiste en contar las colonias que se desarrollan en el medio de elección después de un cierto tiempo y temperatura de incubación, presuponiendo que cada colonia proviene de un microorganismo de la muestra bajo estudio. El método admite numerosas fuentes de variación, algunas de ellas controlables, pero sujetas a la influencia de varios factores.

Definición

Para fines de esta norma se entiende por:

Unidades Formadoras de Colonias (UFC). Termino que debe utilizarse para reportar la cuenta de colonias en placa, las cuales puedes surgir de una célula o de un cumulo de células.

Material y equipo

1. Cajas Petri
2. Pipetas graduadas de 1.0 ml
3. Incubadora

Medios de Cultivo

1. Agar cuenta Estándar
2. Agar nutritivo

Procedimiento

1. Distribuir las cajas estériles en la mesa de trabajo de manera que la inoculación; la adición de medio de cultivo y homogenización, se puedan realizar cómoda y libremente. Marcar las cajas en las tapas con los datos pertinentes previamente a la inoculación y correr por duplicado.
2. Inocular con 1 ml de muestra (agua) en las cajas Petri, agregar de 12 a 15 ml del medio preparado, mezclarlo mediante 6 movimientos de derecha a izquierda, 6 en el sentido de las manecillas del reloj, 6 en sentido contrario y 6 de atrás a adelante, sobre una superficie lisa y horizontal hasta lograr una completa incorporación del inoculo en el medio; cuidar que el medio no moje la cubierta de las cajas. Dejar al diluyente hasta que finalmente se adiciona el medio de cultivo a las cajas, no debe de exceder de 20 minutos.
3. Incubar las cajas en posición invertida (la tapa hacia abajo) por 48 45°± 2 Horas a 25 ± 2 °C.
4. En la lectura seleccionar aquellas placas donde aparezcan entre 25 a 250 UFC, para disminuir el error en la cuenta.
5. Contar todas las colonias desarrolladas en las placas seleccionadas. Incluyendo las colonias puntiformes, Hacer uso del microscopio para resolver los casos en los que no se pueden distinguir las colonias de las pequeñas partículas.
6. Reportar como: Unidades formadoras de colonias. ___ UFC/ml incubadas                 horas a                 °C.

Prueba para Coliformes fecales

1. De cada tubo que muestre formación de gas de la prueba confirmatoria para Coliformes totales, tomar de 2 a 3 asadas y sembrar en  un número igual de tubos con medio de confirmación, caldo EC o caldo bihs verde brillante incubar a 44.5 °C por 24 ± 2 horas.
2. Todos los tubos deben ser colocados en el baño de agua dentro de los 30 minutos siguientes de la inoculación, cuidando que el nivel del agua el medio de cultivo.
3. Registre la presencia a ausencia de formación de gas en los tubos después de 24 horas de incubación a 44.5 °C. La producción en el tubo de fermentación, se considera una prueba positiva (confirmatoria) para organismos Coliformes fecales.

Diagrama

MENITA LA MENSITA

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