Materiales vegetales y extracción de ADN

Introducción

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Estas especies son endémicas de Malasia peninsular.

Estas tres especies endémicas de Malasia peninsular son muy raras y están presentes en pequeñas poblaciones.

Las especies endémicas de orquídeas son tesoros nacionales, que tienen un alto valor comercial entre los coleccionistas y entusiastas de las orquídeas.

por lo tanto, es crucial que se desarrollen marcadores moleculares que nos permitan distinguir fácilmente entre ellos taxonómicamente.

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RAPD: El ADN polimórfico amplificado aleatorio en este método se utiliza oligonucleótidos cortos y arbitrarios con contenidos de GC de al menos el 50% para producir productos de amplificación al azar.

oligonucleótido es una secuencia corta de ADN o ARN, con cincuenta pares de bases o menos. se utilizan como cebadores en reacciones de amplificación, como sondas de hibridación y en bloqueos específicos de ARN mensajero.

Por lo tanto, se puede utilizar para estudiar polimorfismos genéticos dentro de todo el genoma en lugar de solo polimorfismos dentro de una sola región genética.

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Los marcadores SCAR pueden discriminar entre muestras o especies estrechamente relacionadas mediante la amplificación de productos de diferentes tamaños o sin amplificación en muestras no objetivo y amplificaciones positivas en muestras objetivo.

Sin embargo, todavía no existe un marcador genético para la identificación de especies de Coelogyne, endémicas de Malasia peninsular .

Se utilizaron cebadores RAPD para cribar las muestras de ADN de estas tres especies para amplificar bandas específicas de especies reproducibles.

Métodos

Materiales vegetales y extracción de ADN

 Los sedimentos de ADN se suspendieron en 50 micro litro de agua libre de ADNasa estéril y se mantuvieron a -20 ° C hasta que estén listos para su uso.

Amplificación RAPD-PCR

amplicones se sometieron a electroforesis en gel de agarosa TBE (Tris-borato-EDTA) al 1,2% durante 90 minutos a 70 V y se tiñeron con 0,5 µg / ml de bromuro de etidio. El gel se visualizó con un transiluminador UV (UVIdoc, EE. UU.) Y la imagen del gel se tomó usando una cámara (UVItec, Reino Unido). Se identificaron bandas específicas de especies a partir de las bandas producidas durante las amplificaciones de RAPD.

Resultados

Análisis de perfil RAPD

todos los cebadores amplificaron  ADN genómico de Coelogyne kaliana , Coelogyne stenochila y Coelogyne tiomanensis.

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