MÉTODOS Y TÉCNICAS DE ESTUDIO MICROBIOLÓGICO I

I. INTRODUCCIÓN:

Como todos los científicos relacionados con los seres vivos, los microbiólogos necesitan ver los microorganismos que estudian; esto significa que su herramienta imprescindible es el microscopio. También como en el resto de científicos, los microbiólogos necesitan realizar experimentos. La experimentación con microorganismos casi siempre requiere su cultivo en el laboratorio (Ingraham y cols., 1998).

El microscopio compuesto es un instrumento óptico formado por dos sistemas de lentes convergentes, que posibilitan la observación y examen de objetos imperceptibles a simple vista a través de una imagen aumentada, invertida y virtual (Tortora y cols, 1993).

El poder de resolución de un microscopio es la capacidad que tiene éste para separar des puntos que se encuentran muy próximos entre sí. Por ejemplo, si dos puntos están separados por una distancia de 0,2 mm, a más, la vista si los distingue por separado; pero si dos puntos presentan una separación de 0,1 mm o menos, la vista los observará como uno solo pero el microscopio compuesto si los diferenciará separadamente (UNT, 1982).

Las bacterias vivas son tan transparentes que el examen en vida hace difícil el estudio de sus detalles morfológicos por eso es que se acostumbra realizar coloraciones de ellas. Para teñir los microorganismos, como las bacterias, se disponen de un gran número de compuestos orgánicos coloreados (colorantes). En general estos compuestos son un tanto complejos en cuanto a su estructura molecular. De acuerdo con esto se pueden clasificar en grupos como colorantes de trifenilmetano, colorantes de oxacina y colorantes de tiacina (Salle, 1960).

Una clasificación más práctica para el citólogo es de acuerdo con el comportamiento químico del colorante, es decir, ácida, básica y neutra. Un colorante ácido (o aniónico) es aquel donde la balanza de carga sobre el ion colorante es negativa (por ejemplo: eosina, fuccina ácida y el rojo Congo); un colorante básico (o catiónico) es aquel donde la carga llevada por el ion colorante es positiva (por ejemplo: safranina, fuccina básica cristal violeta y azul de metileno). Un colorante neutro es una sal compuesta de un colorante ácido y un colorante básico (por ejemplo: eosinato de azul de metileno). En general, los colorantes ácidos tiñen a los componentes celulares básicos y los colorantes básicos tiñen a los componentes celulares ácidos (Pelczar y Reid., 1982; Ingraham y cols., 1998).

El proceso de la tinción supone una rección de intercambio de iones entre el colorante y los sitios activos de la superficie o del interior de la célula. Los iones teñidos del colorante reemplazan a otros iones en los componentes celulares. Algunos agrupamientos químicos de proteínas y ácidos nucleicos celulares pueden participar en la formación de sales con iones cargados positivamente con Na+ o K+ y de esta manera es posible ver estas

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