NOVENA PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA II

NOVENA PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA II

Objetivo: Aplicar el método de cromatografía para identificación de aminoácidos así como comprender su importancia clínica.

Introducción: Existen varios métodos de separación de mezclas conocidos como cromatografía, que se introdujo en 1903 y su posterior desarrolló y evolución se produce hacia 1930. Según Keulemans y Tswett, la cromatografía es un método de separación en el que componentes a desglosar se distribuyen entre dos fases, una que constituye un lecho estacionario de amplio desarrollo superficial y la otra que es un fluido que pasa a través del lecho estacionario, en pocas palabras, un método en el cual los componentes de una mezcla son separados en una columna adsorbente dentro de un sistema fluyente.

Es empleado principalmente para la separación de los componentes de una muestra, en el cual los componentes son distribuidos entre dos fases. La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido soportado en un sólido o en un gel, mientras que la fase estacionaria puede ser empaquetada en una columna, extendida en una capa o distribuida como una película, entre otras.

La separación empieza cuando una es retenida más fuertemente por la fase estacionaria que la otra, que tiende a desplazarse más rápidamente en la fase móvil. Las retenciones mencionadas pueden tener su origen en dos fenómenos de interacción que se dan entre las dos fases: la adsorción (retención de una especie química en solidos finamente divididos) y la absorción (retención de una especie química por parte de una masa)

La cromatografía es la técnica que separa una mezcla de solutos basada en la diferencia de velocidad en que se desplazan al ser arrastrados por una fase móvil (liquida o gaseosa) por un lecho cromatográfico, que contiene la fase estacionaria (sólida o líquida). Es aplicable a cualquier mezcla soluble o volátil, por lo cual muy utilizada en el laboratorio clínico, por lo cual dentro de los métodos de separación los divide en grupos cromatograficas y no cromatograficas.

Dentro de los tipos de cromatografía existen:

Cromatografía de adsorción: El sólido adsorbe al componente que inicialmente estaba en fase móvil (liquida o gaseosa) (Fuerzas de Van der Waals)

Cromatografia de cambio iónico: el sólido es un cambiador de iones (fuerzas electrostáticas)

Cromatografia de exclusión (o de geles), el sólido es un gel formado por polímeros no iónicos porosos que retienen a las moléculas de soluto según su tamaño.

Cromatografia de afinidad: es un tipo especial de cromatografia de adsorcion, utilizadaespecialmente en bioquímica, en la que un sólido tiene enlazado un llamado ligando de afinidad que puede ser por ejemplo, un indicador enzimático o un anticuerpo

Si es un liquido que se encuentra soportado en un sólido inerte, se trata de la Cromatografia de partición. El soluto se reparte entra la fase móvil (liquido o gas) y la fase estacionaria.

Cromatografía liquido-liquido (CLL) en la que ambas fases son liquidas y, por tanto, se trata de una cromatografía de partición

Cromatografía liquido-sólido (CLS) en la que la fase estacionaria es sólida (adsorción, cambio iónica, exclusión, afinidad).

Cromatografía gas-liquido (CGL), que es una cromatografía de partición.

Cromatografía gas-sólido (CGS), que es una cromatografía de adsorción.

Dentro de las técnicas cromatográficas según la forma de llevar a cabo la separación cromatográfica, encontramos Cromatografía en columna, Cromatografia plana, Cromatografia en papel, Cromatografia en capa fina, etc.

Procedimiento:

Recordando el principio de la práctica de cromatografía de carbohidratos, en esta ocasión nos remitimos  realizar la cromatografía de aminoácidos, en la cual se nos presentaron 2 soluciones problema de las cuales elegimos una para determinar la presencia de qué aminoácidos había en dicha solución.

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