Observar la morfología de bacterias y protozoarios realizando tinción simple

 [pic 1][pic 2][pic 3]

[pic 4]

Objetivo: Observar la morfología de bacterias y protozoarios realizando tinción simple.

Fundamento: Los microbios tienen distinta composición estructural. En algunos casos carecen de núcleo celular, esto es, carecen de una protección para su código genético. En general se reproducen asexualmente, aunque por supuesto existen excepciones. Así, por ejemplo las bacterias pueden formar una gran población de un número pequeño, dividiéndose a gran velocidad de modo continuo.

Material y equipo:

• Asa                                      
• Pipeta pasteur
• Portaobjetos
• azul de metileno

Técnica:

1. Flamear un porta objetos limpio y dejarlo enfriar
2. Esterilizar el asa calentándolo al rojo vivo en el mechero y dejarlo enfriar cerca de la flama
3. Tomar con el asa una pequeña cantidad de muestra y una gota de salina mezclar bien y hacer un frotis
4. Esterilizar de nuevo el asa en el mechero
5. Fijar la preparación pasándola 2 o 3 veces en la flama [pic 5]
6. dejar secar junto al mechero
7. Cubrir la preparación con azul de metileno durante 5 min
8. escurrir y lavar
9. Observar en el microscopio con objetivo de 10x y 40x

Resultado:

                                                                                                                                                                                                 [pic 6][pic 7][pic 8]

[pic 9]

Objetivo: Aprender la técnica básica para preparación de un medio de cultivo

Fundamento: El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente.  Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales  y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

Material:

• 2 Pipetas de 10ml y 1 de 1ml
• Mechero, tripie y tela
• 7 tubos de 13x100
• 7 cajas de Petri estériles
•  Algodón y papel
• NaOH 0.1
• HCl 0.1
• Vaso de pp de 100ml
• Probeta de 100ml
• Agitador y termómetro

Técnica:

1. En el matraz poner el medio deshidratado y adicionar 100 ml de agua mezclar hasta conseguir una superficie homogénea, después incorporar 150ml de agua
2. Calentar el medio hasta que hierva mezclando frecuentemente
3. Calentar con cuidado hasta que se disuelva el agar y retire del fuego
4. Tomar una alicuota de 10ml y depositarla en el vaso y cuando esté a 50C mide el ph y ajustarla con NaOH o HCl de acuerdo a las instrucciones del medio
5. depositar 4ml a cada uno de los 7 tubos y tapar sin apretar

 [pic 10]

 [pic 11][pic 12][pic 13]

[pic 14]

Objetivo: Aprender las técnicas para sembrar bacterias en diferentes medios de cultivo

Fundamento: Un microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo sólido donde las células que se multiplican no cambian de localización; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de células similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecerá como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.

La principal diferencia entre un medio de cultivo sólido y uno líquido es que el medio de cultivo sólido contiene un 1,5–2% de agar-agar, mientras que el medio líquido no contiene agar-agar.

Material:

• Asa
• tubos con medio de cultivo solido
• placas con medio de cultivo

Técnica:

1. Flamear el asa por unos segundos en forma vertical
2. quitar el tapon del tubo y manténgalo en la misma mano en la que tienes el asa . Flamear la boca del tubo que tiene el espécimen que se va a transferir y tapar
3. Quitar el tapon del tubo que se va a incular y proceder al medio de cultivo

[pic 15]

   [pic 16][pic 17][pic 18]

[pic 19]

Objetivo: Aprender la técnica básica de tinción gram

Fundamento: La tinción de Gram es una técnica de laboratorio que permite identificar distintos tipos de bacterias según se coloree su superficie, aportando información muy útil para orientar el tratamiento antibiótico.

Material:

• Cristal violeta
• Yodo de gram
• Alcohol acetona
• Zafranina

Técnica:

1. Preparar un frotis de E. Coli y uno de S. Aeurus y uno con mezcla de ambos
2. Dejar secar y fijar
3. Teñir con cristal violeta 1min
4. Enjuagar con agua corriente suavemente y escurrir
5. Cubrir el frotis con yodo de gram y dejar reposar 1min
6. Enjuagar con agua corriente suavemente y escurrir
7. Decolorar con etanol al 95% para esto inclinar el porta objetos sobre la charola de tinción y añadir goteando el etanol, dejando correr por todo el frotis de 10 a 20 s
8. Detener la acción decolorante lavando con agua
9. Contrastar con safranina por 20 o 30 s, enjuagar y dejar secar el frotis
10. Observar con objetivo de inmersión

[pic 20]

[pic 21][pic 22]

                                                                                                                                                                                                         [pic 23]

[pic 24]

Objetivo: Observar las distintas reacciones que se presentan en las pruebas de catalasa y oxidasa

Fundamento: La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias. Descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. El desprendimiento de burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba es positiva.

...