PCR virtual

PCR virtual

1.

A) Primer: es una pequeña cadena de nucleótidos a partir de la cual la ADN polimerasa inicia la síntesis de una molécula nueva de ADN. Este cebador debe poseer una secuencia de bases complementaria a la del fragmento de ADN que se desea secuenciar.

B) DNA polimerasa: es una enzima que cataliza la polimerización de desoxirribonucleótidos en una cadena de ADN. ADN polimerasas son mejor conocidos por su papel en la replicación del ADN, en la que la polimerasa "lee" una tira de ADN intacto como una plantilla y lo utiliza para sintetizar la nueva cadena.

C) Nucleótidos: son moléculas compuestas de una molécula de azúcar, una unidad de fosfato, y una base nitrogenada (que contiene nitrógeno). Se encuentran en todas partes dentro de las células de nuestro cuerpo, incluyendo el núcleo y el citoplasma. Son necesarios para la construcción de ácido desoxirribonucleico (ADN) y ácido ribonucleico (ARN).

2.

Con la técnica de la PCR es posible obtener millones de copias de un fragmento del ADN (por ejemplo, de un gen de interés). La PCR está diseñada según el principio natural de replicación del ADN. Es un proceso de tres pasos, designado como un ciclo, que se repite un número específico de veces.

Un ciclo de PCR consiste en los siguientes pasos:

1. Desnaturalización

2. Alineación

3. Extensión

Paso 1º PCR: Desnaturalización por calor.

El calor (generalmente > 90°C) separa la doble hebra de ADN en dos filamentos, esto se conoce como “desnaturalización".

Puesto que los enlaces del hidrógeno que unen las bases de uno a otro son débiles, se rompen a altas temperaturas, mientras que los enlaces entre fosfatos y desoxirribosa, que son enlaces covalentes más fuertes, permanecen intactos.

Paso 2º PCR: Alineación – unión de la sonda a la secuencia diana.

• El objetivo no es replicar la hebra entera de ADN sino replicar la secuencia diana de aproximadamente 100-600 pares de bases que es única en el organismo.

• Los iniciadores marcan el final de la secuencia diana: éstos son sintéticos y cortos, creados a partir de una hebra única de ADN y que normalmente constan de 20-30 bases, con una marca de biotina 5’ al final para ayudar a la detección.

• Two primers are included in the PCR, one for each of the complementary single DNA strands that was produced during denaturation. The beginning of the DNA target sequence of interest is marked by the primers that anneal (bind) to the complementary sequence.

• Temperatura de Alineación: generalmente ocurre entre 40°C y 65°C, dependiendo de la longitud y la secuencia de bases de los iniciadores. Permite que éstos se unan a la secuencia diana con alta especificidad.

Paso 3º PCR: Extensión

• Una vez que los iniciadores se han unido a las secuencias complementarias de ADN, la

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