PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y MÉTODOS DE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y MÉTODOS DE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

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Universidad del Valle    

Tecnología en alimentos Facultad de ingeniera en Alimentos                                         Jean Paul López Gutiérrez (1529660)                                                                                   Jader primero Gil (1526230)

RESUMEN

En la práctica de laboratorio se llevó a cabo el proceso de preparación de agar nutritivo para ser usado en el método de cultivo de diferentes microorganismos.

También se llevó a cabo la siembra de agentes bacterianos como son el Staphylococcus aureus y Escherichia coli, para ellos se usaron los métodos de siembra como son el de tubo inclinado, por estrías, por agotamiento, profundidad y siembra en caldo de cultivo.  Esto con el fin de lograr un crecimiento controlados de ellos y observar su crecimiento.  

INTRODUCCION

Los microorganismos son seres vivos  de un tamaño tan pequeño que no se pueden ver a simple vista sin ayuda de un microscopio, estos son importantes estudiarlos ya que la mayoría de estos seres son patógenos.

Su crecimiento puede ser continuo si tienen un suministro apropiado de nutrientes, y condiciones favorables como son el pH y temperaturas  que le permitan crecer exponencialmente.

El agar nutritivo es un medio de cultivo utilizado para propósitos generales como son para el aislamiento de microorganismos que son poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos.
Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.

Las bacterias se reproducen de forma exponencial ya que si se toma el periodo de incubación a la temperatura óptima de crecimiento de los microorganismos aerobios seria de 35 a 37 grados centígrados.

Se procedió a llevar el Erlenmeyer a la estufa y se puso a calentar a una temperatura de 245 grados centígrados en la plancha de agitación y calentamiento, el magneto se utilizó para dar una agitación a la solución y disolverla solución, y así

MATERIALES Y METODOS

Inicialmente se usaron 3 cajas de Petri  y 2 tubos de ensayo vacíos, se tomó agar en polvo aproximadamente 20 mL por cada caja de Petri, los 60 mL se trasvasaron al Erlenmeyer después de haberlo pesado a este se le adiciono una cierta cantidad de agua destilada y por consiguiente se añadió al Erlenmeyer un magneto. (Imagen 1)

[pic 2]Imagen 1: Dibujo animado del Erlenmeyer con un magneto y grumos de agar en polvo.

Se procedió a llevar el Erlenmeyer a la estufa y se puso a calentar a una temperatura de 245 grados centígrados en la plancha de agitación y calentamiento, el magneto a medida que la solución abulia este se movía en forma de hélice batiendo la solución, obteniendo como resultado que los grumos del agar se disolvieran con la solución y obteniendo una solución amarillenta turbia como se muestra en la siguiente imagen. (Imagen 2).

[pic 3]Imagen 2: Solución turbia preparada para trasvasar a los Erlenmeyer y tubos de ensayo.

Continuamente la solución ya preparada se llevó a esterilizar a la autoclave por aproximadamente 30 minutos a un temperatura  de ±121 °C. (Imagen 3).

[pic 4]Imagen 3: Autoclave

Luego de haber salido de la esterilización, Posteriormente se trasvaso la solución  a tres cajas de Petri vacías cada una hasta cubrirlas completamente, de igual manera se adiciono 5 mL a un tubo de ensayo también de esta, al otro tubo no se le añadió la solución preparada, pero se le añadió 5 mL caldo de agar que fue preparado por otro grupo existente en el laboratorio, se dejaron reposar a temperatura ambiente por 10 minutos, cabe resaltar que al tubo que se le agrego también la disolución preparada se inclinó y se dejó reposar de la misma manera de esta manera (Imagen 4).

[pic 5]Imagen 4: Tubo de agar inclinado. 

A partir de estas preparaciones se inició el proceso de sembrado de bacterias en los medios de cultivos realizados. Los tipos de siembra que se llevaron a cabo fueron:

Siembra por profundidad

En esta parte se agregó 1 mL de s aureus al agar nutritivo que estaba aún caliente, se añadió en el centro de la caja con  un movimiento de vaivén hasta cubrirla totalmente con la bacteria posteriormente adicionada, teniendo cuidado de no formar burbujas al hacer este proceso, luego se dejó solidificar y se encubo por 48 horas a una temperatura aproximada de 36 a 37° C. (Imagen 5).

[pic 6]Imagen 5: Ilustración de la adición de la gota en el agar y la homogenización. 

Siembra por agotamiento

Con el asa esterilizada  se tomó una pequeña muestra de la bacteria Staphylococcus aureus, y se  realizó el extendido pero esta vez con líneas delgadas en forma de zigzag pasándolas por todo el agar nutritivo. Se  dejó en la incubadora a la misma temperatura por el mismo tiempo (Imagen 6).

[pic 7]Imagen 6: Método de siembra por agotamiento. 

Siembra por estrías

Con el asa ya esterilizado, se tomó una muestra con dos agentes mezclados los cuales eran s. aureus y e. coli, se procedió a trazar líneas muy juntas primero se realizó la siempre en la parte superior del agar, nuevamente se esterilizo el asa y se giró la caja 90° aproximadamente y se repitió el mismo proceso, posteriormente se continuo haciendo lo mismo en los tres extremos restantes hasta hacerlo en la caja completa como se muestra en la imagen (Imagen 7).

[pic 8]Figura 7: Siembra por estrías.

Siembra por tubo inclinado

Con el asa esterilizada se tomó el tubo  con el agar ya seco y se procedió a realizar la siembra en la parte superficial de él,  se sembró de la misma manera que por agotamiento en forma de zigzag, Se dejó en la incubadora a la misma temperatura y por el mismo tiempo (Imagen 8).

[pic 9]Figura8: Sembrado con tubo inclinado.

Siembra en caldo de cultivo

Se esterilizo el asa hasta que tornara un color rojo vivo, se tomó una muestra de un microorganismo y en el tubo con el caldo de agar se sumergió el asa y se agito hasta que quedara completamente limpia, se incubo a 37°C por 48 horas (Imagen 9)

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