Medios De Cultivos, Recuento De Viables En Placa Y Aislamiento De Colonias

Resumen:

Se utilizaron diferentes medios de cultivos para el crecimiento de microorganismos diferentes entre si. También se realizo un recuento de viables utilizando la técnica de dilución seriada.

Los medios utilizados fueron EMB en el cual se sembró Escherichia coli y Pseudomona aeruginosa en diferentes placas; agar Mossel con el que se incubó Bacillus cereus; Cetrimide con y Pseudomona aeruginosa y Baird- Parker con Staphylococcus aureus.

Se esperó obtener resultados positivos de todos los medios, es decir que se produzca crecimiento del microorganismo sembrado, con excepción del EMB con P.a el cual se realizó solo para verificar que era un no fermentador de lactosa.

Introducción:

Técnicas de diluciones seriadas. Recuento de viables en placa.

Considerando que una colonia bacteriana se desarrolla a partir de una única célula, la técnica de recuento de viables en placa permite determinar el número de bacterias o UFC (unidades formadoras de colonia) presentes originalmente en una muestra a analizar.

Para asegurar un recuento exitoso, el numero de colonias no debe ser mayor a 250, ya que las colonias están demasiado cercanas una de otra como para distinguirlas claramente, ni menor a 25 colonias por razones estadísticas. Con el objeto de garantizar una cantidad aceptable de colonias se hacen diluciones seriadas de la muestra, y una alícuota de las diluciones se siembra en placas con medio de cultivo sólido. La posterior incubación de las mismas permitirá el desarrollo de colonias que puedan contarse. La técnica que utilizaremos implica esparcir el inóculo sobre la superficie del agar con ayuda de la espátula de Drigalsky.

Aislamiento de colonias.

La técnica requiere una reducción del número de microorganismos en el inóculo inicial. La disminución del tamaño de la población asegura que, después de la inoculación, las células individuales estén suficientemente separadas entre sí, en la superficie del agar, como para obtener el aislamiento de las diferentes especies presentes.

 Agotamiento por estría en placa:

Técnica de dilución en superficie que implica esparcir el inóculo, con un ansa, sobre la superficie de una placa con medio sólido.

Existen varios procedimientos. En particular realizaremos las estrías en cuadrante.

 Siembra con Espátula de Drigalsky.

Medios de cultivo.

EMB: Medio para enterobacterias, contiene: peptonas, lactosa, eosina, azul de metileno. Es un medio diferencial y selesctivo y permite diferenciar entre fermentadores de la lactosa y no fermentadores.

Cetrimide: medio para Pseudomonas, es selectivo, contiene peptonas, cloruro de magnesio, sulfato de potasio, cetrimida (detergente catiónico, bromuro de cetiltrimetil amonio) y la adicón de ácido nalidíxico.

Mossel: es un medio para aislar Bacillus cereus, es selectivo y diferencial. Contiene peptonas, extractos, manitol rojo fenol, yema de huevo y polimixina B (antibiótico).

Baird- Parker: es un medio para distinguir Staphyliccicus aureus, es selectivo y diferencial. Contien pepetonas, extractos, cloruro de litio, glicina, piruvato de sodio, yema de huevo emulsionada con telurito de potasio. La glicina y el piruvato promueven el crecimiento de Staphyloccocus.

Objetivos:

Familiarizarse con: el equipamiento de laboratorio y los medios de cultivo necesarios para obtener y mantener cultivos puros; el manejo de material estéril y el procedimiento necesario para obtener subcultivos de microorganismos; el aislamiento de microorganismos a partir de una muestra mixta y las características morfológicas de los microorganismos crecidos en cultivos puros.

Materiales:

 Microscopio.

 Portaobjetos.

 Tinción de Gram: colorantes, mordiente, decolorante.

 Cajas de Petri.

 Diferentes medios de cultivos: 2 EMB, Mossel, Cetrimide y Baird-Parker.

 Ansa.

 Espatula de Drigalsky.

 Mechero.

 Microorganismos.

 Eppendorf.

 Micropipeta.

Procedimientos:

Como primera medida se corroboró si los microorganismos que proporcionaron las profesoras en caja de Petri se trataban de Escherichia coli (E.c), Pseudomona aeruginosa (P.a), Staphylococcus aureus (S.a) y Bacillus cereus (B.c). La tinción de Gram fue la técnica aplicada para observar dichos microscopios al microscopio e identificarlos.

En un portaobjetos se sembró E.c y P.a y en otro S.a y B.c. Se siguió el protocolo de tinción de Gram y se llevo dichos portaobjetos al microscopio y se pudo observar:

 En E.c y P.a que ambos eran Gram negativas.

 En E.c se observó bacilos de cadena corta, aislados, de color rosa.

 P.a bacilos de color rosa.

 En el portaobjetos de B.c y S.a la tinción proporciono el dato que eran Gram positivos, de color púrpura.

 B.c: bacilos de cadena de 4 miembros, presencia de esporas transparentes.

S.a en forma de racimos, cocos.

Gracias a estas deducciones obtenidas, se procedió a la elección de los medios de cultivos apropiados para cada microorganismo. Se cultivo a E.c

...