Medios De Cultivo Bacteriano

MEDIOS DE CULTIVO BACTERIANO

Un cultivo es un método para la multiplicación de microrganismos, tales como bacterias y virus, en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Este empleado como un método fundamental para el estudio de las bacterias y otros microrganismos que causan enfermedades.

Primeros cultivos puros:

Gran parte del trabajo inicial sobre las técnicas para la obtención de cultivos puros fue realizado por Brefeld, trabajando con hongos. El introdujo la práctica de aislar células, así como la del cultivo de hongos sobre medios sólidos, para lo cual añadía gelatina a sus cultivos líquidos. Este método funcionaba bien para los hongos pero no para las bacterias por que eran mas pequeñas, para esto se idearon otros métodos especiales para las bacterias. Uno de los primeros que se propusieron fue el método de las diluciones. Un fluido que contenía una mezcla de bacterias se diluía en un medio estéril, con la esperanza de que en último término pudiera lograrse un crecimiento que tuviera su origen en una sola célula, aunque este método resulto ser tedioso, difícil e incierto. Para esto Koch dedujo que el desarrollo de métodos sencillos para la obtención de cultivos puros de bacterias era esencial par el desarrollo de la nueva ciencia.

Koch realizo experimentos utilizando superficies estériles de patatas cortadas, que colocaba en vasijas estériles cubiertas con un vidrio y luego las inoculaba con bacterias, pero resulto que este método tenia desventajas como: la superficie del corte está húmeda, lo que le permite a las bacterias móviles desplazarse libremente sobre ellas; el substrato es opaco y, por ello a veces resulta difícil ver las colonias, además de que la patata no es un buen medio nutritivo para muchas bacterias. Para esto Koch pensó que seria mejor si se pudiese solidificar un medio líquido bien conocido, añadiendo una mezcla transparente. Así se podría preparar un gel traslúcido sobre el cual seria muy fácil distinguir las colonias de bacterias que se desarrollen y también se puede modificar la composición del líquido base, para poder atender los diversos requerimientos nutricionales de las distintas bacterias. Con esta idea, añadió gelatina como agente endurecedor, unas ves solidificadas se sembraban una minúscula cantidad de células bacterianas con una aguja de platino previamente esterilizada.

Koch descubro también que en lugar de sembrar las bacterias sobre la superficie de la gelatina ya solidificada, podía mezclarlas con la gelatina fundida , para que cuando se solidificar, las bacterias quedaran inmovilizadas dentro del gel y ahí se desarrollaban dando colonias aisladas.

Los medios de cultivo se clasifican según su estado físico:

Medios Líquidos o caldos de cultivo: Son los que una vez preparados se mantienen enestado líquido. Suelen utilizarse para realizar la suspensión de disolución de la muestra aanalizar con el fin de conseguir la disolución madre. Pueden presentarse en bolsas de 5litros, en frascos de 250 ml, o en tubos de un solo uso.

Medios sólidos: Contiene un agente espesante, por lo general agar a una concentración del 1,5 %. El agar es un derivado de algas. Es sólido a temperaturas inferiores a los 40 o 45ºC.

Medios semisólidos: Tienen una consistencia intermedia entre la de los anteriores. Suelen contener una concentración de agar del 0,7 %.Tal como hemos apuntado, la mayoría de los medios de cultivo se compran hoy en día ya preparados. Unos llegan para su uso en distintas presentaciones, y otros deshidratados. La ventaja de los primeros es su comodidad y la desventaja, que su plazo de conservación es corto. Los deshidratados, en cambio, pueden conservarse bastante más tiempo, pero hay que prepararlos antes de usarlos.

Según los medios de aislamiento primarios:

Para Usos Generales: No Selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos difíciles de hacer crecer. A menudo están enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)

Selectivos: (de moderada o de alta selectividad) se añaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia añadidas, se varía el tipo y grado de selectividad. Contienen uno o varios compuestos que inhiben el crecimiento de un determinado tipo de microrganismos y no afectan a otros tipos. Ej: El cristal violeta inhibe las Gram +.Otra manera es modificar la fuente de carbono; si sustituimos la glucosa por maltosa, seleccionamos aquellos microorganismos capaces de digerirla

Enriquecidos: Algunos microorganismos no son capaces de desarrollarse en medios de cultivo normales. Para cultivarlos necesitamos añadir sustancias altamente nutritivas como sangre, suero, extractos de tejidos animales. Estos medios son los medios enriquecidos, y los microorganismos que crecen en ellos son microorganismos exigentes o fastidiosos.

Suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio con Vitamina K). Ejemplo: agar-sangre.

Para Aislamientos Especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen requerimientos de grupos específicos de bacterias, ayudando a su identificación (Lowenstein).

Según su composición:

Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los más empleados se preparan a partir de tejidos animales, y más raramente de vegetales. Su composición no es exactamente definida, y por consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales, donde la reproductibilidad no podrá ser exacta. En la práctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los más empleados.

Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas, resultando un medio de composición perfectamente definida.

Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento exigidos para ciertos gérmenes hace que la fabricación de un medio sintético para estos gérmenes sea imposible o demasiado cara. En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgánico complejo (extracto de levadura, extracto de tejidos, etc.).Ciertos gérmenes no crecen en ningún medio por muy enriquecido que esté éste, haciéndolo exclusivamente en células vivas

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