PRÁCTICA DE LABORATORIO PCR

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

CIENCIAS BASICAS BIOMEDICAS

PRÁCTICA DE LABORATORIO

PCR

Objetivo:

Amplificar el material genético de una muestra de AND de bovino empleando la técnica de reacción en cadena de la polimerasa PCR

Materiales:

Tubos de PCR 0,2 ml

Micropipetas

1 Gradilla para PCR

Servilletas

Alcohol

Reactivos:

Nucleotidos (adenina, citocina, guanina, timina),

Primer sentido y antisentido

Taq AND polimerasa

H2O bidestilada

ADN extraido

Equipo

Termociclador

Metodología

1. Limpie el área de trabajo con una servilleta impregnada con alcohol

2. Coloque cada uno de los materiales e implementos sobre una servilleta limpia

3. Descongele cada uno de los reactivos utilizados en la reacción

4. Ubique un tubo de reacción de 0,2 ml y márquelo en la tapa con las iniciales de su nombre

5. Utilice los siguientes volúmenes para ubicarlos dentro del tubo de 0,2 ml a partir del siguiente protocolo

Reactivo Volume por muestra

Nucleotidos (adenina, citocina, guanina, timina) 2 µl de cada uno

Primer sentido y antisentido 2 µl de cada uno

Taq ADN polimerasa 2ul

H20 3 µl

ADN (0,5 – 5 ng/µl) 3 µl

6. En el termociclador utilice el siguiente protocolo de amplificación

30 CICLOS 4 ºC



DENATURACION ANILLAMIENTO EXTENSION

96 ºC

10 segundos 55 ºC

5 segundos 60 ºC

30 segundos

Trabajo independiente

A. Defina con sus palabras el significado y la importancia de la reacción en cadena de la polimerasa en la biología molecular.

B. Para realizar la PCR es necesario tener un kit de reactivos específicos, defina cuales son y cuál es su función dentro de la amplificación de ADN.

C. Acerca de la enzima encargada de la polimerización en la PCR responda:

Cuál es su nombre y de qué organismo es extraída.

A que temperatura tiene su máxima eficiencia.

Es posible que la enzima trabaje a 37º C.

D. Cuáles son las temperaturas adecuadas dentro de la PCR y defina que sucede en cada una de ellas.

E. Mencione cual es el equipo en el cual se monta una PCR y concluya cual será la función de este equipo para que se lleve a cabo la reacción.

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