Peoceso de experimentación con bacterias (tincion de gram)

La tinción de Gram es el método de tinción más utilizado en microbiología. Es una mancha diferencial porque divide las bacterias en dos clases, gram positivas y gram negativas.

Pausa En el primer paso del procedimiento de tinción de Gram, las células de un cultivo nuevo se transfieren a un portaobjetos limpio y se dejan secar. Si las células están en una placa de agar, primero deben transferirse a un medio líquido para su dilución.

Las células deben formar una película delgada, apenas visible. Esto se puede lograr untando células obtenidas de la superficie de un medio de agar o de un cultivo líquido.

Deben usarse cultivos frescos porque, a medida que las células envejecen, pierden su capacidad de retener la mancha.

Las células se fijan al portaobjetos pasando ligeramente por encima de la llama de un mechero Bunsen.

Después de pasar por encima de la llama, el tobogán debe sentirse caliente cuando se toca con el dorso de la mano, pero no debe estar demasiado caliente.

Luego, las células fijas se tiñen con el colorante básico, cristal violeta, durante 30 a 40 segundos. El portaobjetos se enjuaga con agua para eliminar el exceso de manchas. En este punto, todas las células aparecen de color púrpura bajo el microscopio.

A continuación, se agrega una solución de yodo de Gram y se retiene en el portaobjetos durante aproximadamente un minuto

El yodo se combina con el cristal violeta para formar un complejo de tinte-yodo, disminuyendo así su solubilidad dentro de la célula. En este punto, las células todavía parecen ser resistentes.

Las células luego se decoloran lavando con etanol o acetona. Este es el paso diferencial. Las bacterias Gram positivas retienen el cristal violeta, mientras que las bacterias Gram negativas no

El etanol o la acetona se deben agregar gota a gota, con el portaobjetos inclinado en ángulo, hasta que la gota que sale del borde del portaobjetos apenas comience a volverse colorista.

Incluso las células gram positivas pueden perder el complejo cristal violeta-yodo durante una decoloración excesiva y prolongada

El exceso de etanol se lava con agua. Cuando se observa bajo el microscopio, las células gram positivas aparecen de color púrpura y las células gram negativas son incoloras.

Finalmente, las células enjuagadas se cubren con la contratinción, safranina, durante 20 a 30 segundos. Esto tiñe las bacterias gramnegativas de color rosa. Después de enjuagar con agua, el portaobjetos se seca con papel de filtro.

Cuando se observa microscópicamente, las bacterias gram positivas son moradas y las bacterias gram negativas son rosas

En general, la tinción de Gram se correlaciona con la estructura de la pared celular entre las bacterias. Se cree que el etanol encoge el peptidoglucano grueso en las células grampositivas, reteniendo así el tinte.

La gruesa capa de peptidoglicano

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