Plásmidos bacterianos

María Araceli Samperio Domínguez

RESULTADOS

Para lograr el correcto funcionamiento se necesita llevar acabo ciertos pasos: primero, el gen del interés debe ser identificado, como el gen de la insulina tendría que ser aislado de las células bacterianas. Un plásmido es una secuencia circular, double-stranded de ADN, que las replica en bacterias y que son parte del cromosoma bacteriano. El gen se inserta en el plásmido en donde es tomada por una bacteria las bacterias se reproducen y comienzan a generar la proteína deseada.

Plásmidos bacterianos

Las enzimas de restricción fueron descubiertas en 1968, las cuales son parte importante durante el proceso de producción de insulina.

Las enzimas de restricción se utilizan para cortar un plásmido abierto, la misma enzima se utiliza para cortar el gen deseado fuera del cromosoma. Esto hace dos cortes que emparejan y cuando se combina el gen y el plásmido forman un enlace temporal, posteriormente este es sellado con el ADN ligasa.

Los plásmidos que comienzan el procedimiento se llaman vectores reproductivos que es una molécula que puede llevar el ADN externo a una célula y replegarla en esta misma. Este plásmido también incluye un gen que le confiere resistencia a la ampicilina y un segundo gen llamado lacZ. El sitio de restricción realiza un corte se localiza en el gen lacZ, si el ADN extremo se inserta en el gen lacZ donde la enzima de restricción realizo su corte, el gen lacZ da como terminada su función. Las enzimas de restricción se mezclan con los plásmidos y se agregan los genes deseados, es decir, aquellos genes que desean combinar con los plásmidos. En donde se inducen a las bacterias que interactúen con los plásmidos, estos se multiplican en un medio de ampicilina.

Si un grupo de bacterias toma un plásmido que tiene el gen de lacZ, significa que ese plásmido no es recombinante, en donde tomara un color azulado. Mientras que las bacterias que no tomaron ningún plásmido no tendrán la capacidad de crecer dentro de la ampicilina, por lo que solamente aquellas bacterias que tomaron el plásmido crecerán y aquellas que tengan insertado el gen de lacZ tendrán una apariencia blanquecina.

Para realizar los marcadores de forma radiactiva o con un marcador fluorescente en el ADN desnaturalizado de las bacterias se puede efectuar con variaciones de temperatura o con productos químicos. Cuando estas son marcadas, la cadena complementaria del ADN de la bacteria se lanza con el gen de la insulina. De esta manera sabemos cual es la bacteria que tiene el gen deseado de la insulina, en donde esta misma puede colocarse como medio de cultivo para que se pueda duplicar el gen de la insulina técnica conocida como de hiperhibridación

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