Frotis Bacteriano

EXPERIENCIA: PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO

1.- Problema

• Preparación de un frotis bacteriano.

Frotis: Extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de

separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es

muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Posteriormente, el frotis debe ser fijado al vidrio

del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la

observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos

lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y

adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles

agrupaciones de células que pudiera haber.

2.- Realización del frotis

• Colocamos una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy

poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo

de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.

• Flameamos el asa de siembra, tomamos, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del

cultivo bacteriano en medio sólido y lo transferimos a la gota de agua. Removemos la mezcla

con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida

para facilitar su secado.

• Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros

pasos. Tomamos con el asa de siembra una gota de la suspensión bacteriana, la colocamos y la

extendemos directamente sobre el portaobjetos. Esperamos hasta que el líquido se evapore o

aceleramos su evaporación acercando el porta a la llama del mechero, teniendo cuidado de no

calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.

3.- Fijación de las bacterias al portaobjetos

• Por calor: Pasamos tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejamos

enfriar el porta entre los pases.

• Con metanol (para bacterias procedentes de medio líquido): Añadimos unas gotas de metanol

sobre la extensión completamente seca. Golpeamos el portaobjetos por su canto con cuidado

contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol. Esperamos a que el

metanol se evapore completamente.

• Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, podemos observar las preparaciones al

microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es

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