Frotis Y Tintines

FUNDAMENTOS Y OBJETIVOS:

Los frotis sanguíneos son extensiones de sangre que nos brindan información acerca de la forma de las Células sanguíneas y el número de ellas presentes en la sangre.

Nuestro objetivo es comprobar como se realiza una buena extensión e intentar que no aparezcan en las extensiones ningún tipo de defecto. Comprobar que el frotis realizado tenga las partes que lo componen: cabeza, cuerpo y cola.

Las tinciones se utilizan fundamentalmente para que aumenten el contraste y la resolución del Frotis.

La técnica de May Grünwald-Giemsa combina los principios de coloración desarrollados por May Grümwald y Giemsa usando 2 soluciones colorantes, la May Grümwald contiene eosina y azul de metileno disueltos en etanol, la la solución Giemsa contiene eosina, azul de metileno y productos de oxidación de este segundo compuesto.

Al observar nuestra muestra con el objetivo 100x comprobaremos que coloración adquieren nuestras muestras y como se diferencian las células en el Frotis sanguíneo.

La tinción de Wrigth emplea un colorante que es una solución de eosina y una mezcla de azul de metileno junto con otros derivados del metanol. Por ello no es necesario un paso previo de fijación antes de la coloración (sólo si se van a guardar las extensiones sin teñir de un día para otro). Las células se observan coloreadas igual que con la tintinó de Giemsa.

Al teñir la muestra con esta técnica, observaremos que coloración adquiere el frotis sanguíneo y determinaremos como se ven las células sanguíneas con esta coloración.

MATERIALES:

Indumentaria de laboratorio

Microscopio

Papel de filtro

Papel secante

Algodón hidrófilo

Alcohol

Lancetas

Portaobjetos

Micropipeta

Gradilla o portatubos

Pipetas Pasteur

Vasos de precipitado

Cristalizadores

Puentes

Metanol

Colorante Giemsa

Colorante May Grünwald

Azul de metileno

Eosina

Aceite de inmersión

Lejía

Timer

PROCEDIMENTO:

Para realizar la preparación de frotis con la técnica de los portaobjetos correctamente, se hizo una práctica previa con azul de metileno; utilizando dos portaobjetos uno para la extensión y otro para extender la muestra, coloque una gota de azul de metileno en el borde de un portaobjetos que había limpiado de antemano con metanol y papel secante, con otro porta procedí a realizar la extensión de la gota colocándolo en una posición inclinada mas o menos a 45º, lo desplace hacia atrás hasta que la gota se extendiera por el borde del porta extensor, sosteniendo el portaobjetos soporte con la mano izquierda, luego lo deslice hacia delante para que se extendiera la muestra en el portaobjetos. Se hizo esta esta prueba varias veces para no incurrir a errores cuando hiciésemos el frotis o extensión con la gota de sangre.

Visualización del proceso

Al terminar esta práctica de extensiones comenzamos con la preparación de tinciones. La primera tinción utilizada fue la May Grünwald-Giemsa.

Para realizar este frotis utilice una muestra de Sangre contenida en un tubo con EDTA, dispuesto en una gradilla para trabajar con precisión; utilice una micropipeta, para sacar 5μl de sangre, posteriormente realice la extensión con la técnica portaobjetos, coloque los 5μl en un portaobjetos rotulado con el nombre Muestra 1, y extendí la gota de sangre. Realice dos frotis ( Muestra 1 y Muestra 2) con este mismo procedimiento.

Una vez realizado el frotis sanguíneo lo deje secar al aire

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