Práctica: pruebas primarias de identificación bacteriana

PRÁCTICA: PRUEBAS PRIMARIAS DE IDENTIFICACIÓN BACTERIANA

CUESTIONARIO PREVIO:

1. Describa en qué consiste el sistema de nomenclatura binomial de Linneo, cuando se desea darle un nombre a un ser vivo.

1. Describa qué son las pruebas primarias de identificación bacteriana y mencione para qué sirven en general.

1. Describa el fundamento, realización e interpretación de cada una de las Pruebas Primarias: Tinción de Gram, catalasa, oxidasa, motilidad, OF (Oxidación-Fermentación) y acido de la glucosa.

OBJETIVO:

El alumno adquirirá los conocimientos y la habilidad para identificar el género bacteriano a partir de un cultivo puro, realizando la inoculación de diferentes medios de prueba y llevando a cabo procedimientos de laboratorio encaminados al mismo fin.

MATERIAL:

• Mechero de Bunsen

• Atomizador con  benzal al 10%.

• Servitoallas

• Jabón líquido antibacterial

• Marcador de Tinta Indeleble

• Encendedor

• Asa de filamento redondo (Asa bacteriológica).

• Asa de filamento recto.

• Tubos con medio de OF (2 por equipo)

• Tubos con Caldo rojo de fenol + glucosa con Campana de Durham (Opcional, 1 x equipo).

• Frasco con 100 ml de aceite mineral estéril por grupo

• Estufa bacteriológica a 37 C por grupo

• 6 Frascos de Gerber con Palillos de cocina cuadrados estériles.

• Tiras o discos para oxidasa o reactivo tetrametil parafenilendiamina.

• Portaobjetos

• Cubreobjetos

• 1 barra pequeña de plastilina por grupo

• Frasco goteros color ámbar con 10 ml de Peróxido de hidrógeno al 30% (1 por equipo)

• Microscopios ópticos (1 x equipo).

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DIAGRAMA GENERAL DE TRABAJO:

[pic 1]

Cepa pura a identificar

Tinción de Gram        Morfología colonial

[pic 2]

Consulta de

tablas

[pic 3][pic 4][pic 5][pic 6][pic 7]

Identificación

del

género

bacteriano

2

Se le pide por favor que durante el desarrollo de la práctica de pruebas primarias utilice usted el formato que viene al finalizar la descripción de todas las pruebas para que pueda ir asentando sus resultados y no se le extravíen. Se le sugiere que el llenado de la misma lo haga con lápiz, para poder corregir errores si los hubiera.

1) TINCIÓN DE GRAM

La primera prueba que se realiza para la identificación del género bacteriano, después de la purificación de la cepa y el estudio de su morfología colonial, es la tinción de Gram. Esta, como ya se mencionó en la práctica correspondiente, permite la clasificación taxonómica de las bacterias y suele aportar datos acerca de la forma bacteriana y la agrupación.

Cabe mencionar, que el resto de las tinciones mencionadas en las prácticas anteriores serán realizadas sobre la cepa en estudio de acuerdo a lo que reporte la historia clínica del paciente y el diagnóstico presuntivo relacionado a esta. Así, en casos sospechosos de cuadros producidos por los géneros Mycobacterium o Nocardia se realizará la tinción de Ziehl Neelsen, la tinción de esporas se realizará cuando se cree que se trata de un cuadro producido por Clostridium o Bacillus y la tinción de cápsula cuando se sospeche de alguna bacteria capsulada como Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Bacillus anthracis, etc.

2) PRUEBA DE CATALASA

Fundamento:

Determinar la capacidad de una bacteria para desdoblar el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno, por medio de la enzima catalasa.

Metodología e interpretación:

Prueba en portaobjetos: Con ayuda de un palillo estéril, se transfieren bacterias del centro de una colonia (inóculo denso), a un portaobjetos limpio. Posteriormente se agregan 1 ó 2 gotas de peróxido de hidrógeno al 3%. Si después de adicionar el reactivo se forman burbujas (efervescencia), el resultado es positivo. La ausencia de burbujas indicará un resultado negativo.

[pic 8]

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[pic 9]

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3) PRUEBA DE OXIDASA

Fundamento:

Determinar si una bacteria produce la enzima oxidasa intracelular, la cual participa dentro de la cadena respiratoria.

Metodología e interpretación:

Para realizar esta prueba se utilizan como sustratos diversos colorantes que funcionarán como aceptores artificiales de electrones. La p-fenilendiamina y el indofenol son algunos ejemplos que funcionan como aceptores o dadores de electrones. Estos sustratos artificiales son incoloros o coloreados según el estado en que se encuentren (oxidados o reducidos), pero la reacción oxidasa final muestra siempre un producto coloreado. Estos reactivos pueden estar impregnados sobre tiras o discos de papel o bien puede prepararse el reactivo en solución justo antes de realizar la prueba y aplicarlo sobre un papel filtro o directamente sobre el crecimiento en el agar.

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