Prática “EXTRACCION DE ADN”

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Objetivo. Extraer el ADN de las células del hígado de un pollo o de una fruta como el kiwi.

Problema. ¿El hígado de un animal o de una fruta pueden ser una fuente para obtener ADN?

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Material:

• 1 probeta de 100 mL                        
• colorante de anaranjado de acridina        
• 2 g de sal                                        
• licuadora (o mortero y cuchillo o  hielo        
• recipiente de vidrio                                
• vaso de precipitado graduado de 500 y de 200 mL
• colador                                                [pic 2]
• recipiente para baño maría                        
• agitador de vidrio o de plástico
• parrilla eléctrica        
• balanza        
• un termómetro.        

Reactivos:

• 50 mL de etanol al 95%
• colorante de anaranjado de acridina
• 2 g de sal

Material que debe aportar el alumno:

• hígado de pollo
• un kiwi
• detergente liquido
• ablandador de carne ( o jugo de papaya)
• sal de mesa
• plato de cartón
• licuadora (mortero o cuchillo)
• recipiente de vidrio
• colador
• cuchillo y tenedor para cortar y hacer pure
• papel encerado o plato de cartón                        

Antecedentes

1. Anota la definición química del ADN.

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1. Indica su localización en la célula eucariótica.

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Hipótesis

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Conceptos clave

El ADN es el material genético de los organismos, su nombre completo es ácido desoxirribonicleico. Una subunidad de ADN se conoce como nucleótido, consiste de una base nitrogenada, un azúcar y un grupo fosfato. Cientos de miles de nucleótidos se unen dando lugar a una cadena polimérica, y dos cadenas de nucleótidos se entrelazan por enlaces débiles intermoleculares, de manera que forman una doble hélice para construir la molécula completa de ADN. Esta sustancia está contenida en los cromosomas presentes dentro del núcleo celular. La secuencia de las sub-unidades del ADN determina las características de cada organismos. Se puede extraer ADN con los tejidos de un organismo con un procedimiento muy simple  y económico como el que se propone en este experimento.

[pic 3]

Procedimiento.       ADN DE HÍGADO DE POLLO

1. Prepara un baño de agua y hielo, colocándolos en un recipiente a una profundidad de 5 a 8 cm. Pon los 50 mL de etanol frío en un vaso de precipitados de 100 mL y colocándolos en el baño de hielo.
2. Prepara la disolución de extracción de ADN: disuelve 2 g de sal en 90 mL de agua en un vaso de precipitados de 200 mL. Luego agrega 10 mL de detergente líquido y agita (¡muy suavemente!) con el agitador.
3. Cortar en pequeños trozos el hígado de pollo y luego colocarlo en licuadora. Agregar agua como para lograr rápidamente una mezcla con la consistencia de una crema. Se vierte el licuado en el vaso graduado usando un colador.
4. Medir el volumen del licuado y agregar una cuarta parte del volumen obtenido de detergente liquido (Ejemplo: se obtienen 10 mL de licuado, agregar 2.5 mL de detergente) Revolver cuidadosamente. (Disolución de extracción previamente preparada)
5. Añadir una cucharada de suavizador de carne o de jugo de papaya y revolver con cuidado durante cinco minutos. Recuerda que si se mezcla con mucha fuerza, puedes romper el ADN. Observar detenidamente lo que sucede.
6. Vaciar la mezcla en un recipiente largo y delgado hasta llegar a la mitad del recipiente. Ladear el recipiente y agregar el alcohol con mucho cuidado, evitando que se mezcle con el líquido de abajo. Luego de unos minutos se podrán observar unos filamentos blancos dentro del alcohol que se elevan de la mezcla de hígado. ¡Estos filamentos blancos con el ADN de pollo! ¡Puede agregarse el alcohol por medio de un gotero, dejando resbalar las gotas con el gotero inclinado.

* Permite que la disolución repose por dos minutos, sin moverla. Se formará un precipitado blanco en la interfase con el alcohol. Éste es el ADN, y aparece como una sustancia resbalosa, como una especie de mucosa blanca.

Si lo deseas, puedes recoger el ADN, enrollándolo en el popote o agitador delgados a partir de la interfase con el alcohol. Interpreta tus observaciones.

1. Usa la misma varilla de vidrio para pasar algunos de estos filamentos a un porta objetos limpio y agregar 2 o 3 gotas de colorante de anaranjado de acridina; coloque un cubreobjetos y observe la preparación a seco débil y posteriormente a seco fuerte. No deseche el  material que quedó en el tubo.

Describe la apariencia del material observado en el microscopio.

Procedimiento   del    ADN de KIWI   [pic 4]

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