Practica Dos Fisiologia

Introducción:

La hemostasia es el proceso por el cual se forman coágulos en las paredes de los vasos sanguíneos dañados que impide la pérdida de sangre mientras esta se mantenga en estado líquido dentro del sistema vascular. Un conjunto de mecanismos sistémicos complejos interrelacionados opera para conservar el equilibrio entre la coagulación y la anticoagulación.

Las sustancias químicas involucradas en la coagulación se conocen como factores de coagulación, la cual implica una cascada de reacciones que se pueden dividir en tres etapas: formación de protombinasa, conversión de protrombina en trombina y conversión del fibrinógeno soluble en fibrina insoluble .

Es importante saber que la sangre consiste en un líquido rico de proteínas conocido como plasma, en el cual están suspendidos los elementos celulares: leucocitos, eritrocitos y plaquetas. El volumen total normal de sangre circulante es cercano a 8% del peso corporal, de lo cual el 55% de este volumen es plasma. En situaciones normales, la sangre humana contiene 4000 a 11000 leucocitos por microlitro. Los eritrocitos transportan la hemoglobina en la sangre y por lo tanto el pigmento rojo portador de oxígeno en los eritrocitos de los vertebrados es la hemoglobina. Las plaquetas son pequeños cuerpos granulados que se agregan en los sitios de lesión vascular.

La membrana de los eritrocitos humanos contienen diversos antígenos del cuerpo sanguíneo, también llamados aglutinógenos. Los más importantes y los más conocidos son los antígenos A y B, pero hay muchos más.

Los antígenos A y B se heredaran como dominantes mendelianos y las personas se clasifican en cuatro tipos sanguíneos principales con base en ellos. Los individuos con tipo A tienen el antígeno A; aquellos con tipo B, el antígeno B; los de tipo AB poseen ambos y, el tipo O, no tiene ninguno. A diferencia de los antígenos ABO, el sistema no se ha detectado en elementos distintos a los eritrocitos D es, por mucho, el componente más antigénico, y el termino Rh-positivo como se usa, significa que el individuo tiene aglutinógeno D. La proteína D no está glucosilada y su función se desconoce. El sujeto Rh-negativo no posee antígeno D y desarrolla la aglutinina anti-D cuando se le inyectan células D-positivas .

Hipótesis:

-La muestra de sangre expuesta a 37°C coagulara en menos de diez minutos, mientras que las muestras expuestas a 60°C y a 0°C no coagularán.

-Al poner las muestras de 60° y 0° C en el baño de 37°C se coagularan al mismo tiempo, aproximadamente 20 minutos.

-La muestra de sangre con citrato de sodio no va a coagular hasta ponerle gotas de una solución de cloruro de calcio y en un transcurso de diez minutos.

Objetivos:

Valorar en el laboratorio, las diversas etapas del proceso de hemostasia mediante técnicas “in vitro” e “in vivo”.

Desencadenar e inhibir “in vitro”, (el proceso de la coagulación sanguínea) modificando variables fisiológicas como la temperatura y la concentración de calcio en el medio.

Observar en el microscopio al polímero de la fibrina.

Manejar adecuadamente las muestras de sangre humana.

Observar la reacción de aglutinación en muestras de sangre al mezclarlas con antisueros.

Determinar los diferentes tipos sanguíneos.

Determinar la frecuencia de los grupos sanguíneos en la población estudiada y compararla con otras poblaciones ya reportadas.

Metodología

Perforar el dedo de un alumno con una lanceta y poner el dedo sobre un papel filtro, repetir la maniobra cada 10 segundos dejando espacios de 0.5 cm entre cada gota de sangre y dejar de hacerlo hasta que ya no aparezca sangre en el papel. Anotar el tiempo trascurrido durante el proceso.

Se cronometra el tiempo que pasa a partir de que se ponen 3 tubo de ensaye con 1 ml de sangre cada uno en: baño maría a 37 grados, otro en hielo y el tercero en agua a 60 grados, anotar el tiempo que transcurrió hasta la coagulación de la sangre (después de que pase el triple de tiempo en que tardo en coagular la sangre a 37o colocar los tubos restantes en el baño de 37o).

Colocar 1 gota de citrato de sodio en un tubo de ensaye con 1 ml de sangre, agitar y dejar reposar 15 min en el baño maría de 37o. Después de un tiempo si no se observa coagulación se agregan 3 gotas de cloruro de calcio se agita y se regresa al baño, observar por 30 segundos.

Preparar una cámara húmeda y dejar que se sature de vapor de agua durante 15 min, después deposite una gota de sangre fresca en un portaobjetos y coloque sobre ella un cubreobjetos. Coloque el portaobjetos sobre el triángulo dentro de la caja de Petri, después de 30 min sacar el porta objetos, lavarlo con agua destilada y agregar unas gotas de azul de metileno, observar con el microscopio y dibujar las fibras.

Colocar en dos porta objetos 2 gotas de sangre y agregar suero con anti-A, B, AB y D observar si hay aglutinación.

Resultados:

A) FASE VASCULAR Y FASE PLAQUETARIA.

Se lograron 10 marcas de gotas de sangre que cada vez iban en disminución de su diámetro, por lo tanto son de diferente tamaño, así hasta que se desaparecieron, como se muestra en la Fig. 1.

El tiempo necesario para la hemostasia fue de 17 segundos.

B) FASE PLASMATICA

Solo presento coagulación el tubo de la Fig. 2 y tardo un tiempo de 7:43 minutos.

Los demás tubos expuestos a temperaturas de 60° Y 0° no presentaron coagulación.

De forma inicial De forma inicial

tubo a 0°C tubo de 60°C

20 min (no coagulo) 20 min (no coagulo)

En baño María de 37°C En baño María

7:37 min (coagulación completa) 45 minutos (coagulación semicompleta, debió a que tenía algunas partes viscosas)

Tardo mucho para la coagulación del tubo a 60°C inicialmente.

El proceso de coagulación de los tubos restantes como el de 0°C fue más rápido, debido a que fue más fácil pasar de un estado de 0° a uno de 37°. Pero el tubo de 60° tardo más en coagularse porque es más difícil pasar de un estado de 60° a 37°.

C) ACCIÓN DE CALCIO

De forma inicial

tubo citrato de calcio + 1 gota de sangre

reposar 15min a 37°c

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