Prueba de Osazonas

Prueba de Osazonas

Fundamento:

Las osazonas se forman cuando los azucares reaccionan con fenilhidrazina. La reacción involucra la formación de fenilhidrazona. La reacción puede ser utilizada para identificar monosacáridos. Involucra 2 reacciones: Primero la glucosa con fenilhidrazina produce glucosafenilhidrazona por eliminación de una molécula de agua del grupo funcional. El siguiente paso involucra la reacción de un mol de glucosafenilhidrazona con dos moles de fenilhidrazina, esa es la razón del exceso de fenilhidrazina. La primera fenilhidrazina oxida el carbono alfa al grupo carbonilo y la segunda fenilhidrazina implica la eliminación de una molécula mas de agua con el nuevo formado grupo carbonilo de ese carbono oxidado que forma un enlace carbono-nitrógeno, el carbono alfa es atacado aquí porque es el que más reacciona al átomo de carbono. Los cristales en forma de aguja indican que el azúcar reductor es glucosa o fructosa, los que tienen forma de girasol indican la presencia de maltosa y las que presentan forma de erizo o pólvora indican presencia de lactosa (Vibzz lab, 2020).

La técnica fue desarrollada por Emil Fischer (1888), un químico alemán, para identificar diferentes azucares. Fischer fue capaz de diferenciar los tipos de azúcar mediante el estudio de los cristales que se formaron a partir de su procedimiento.

Materiales:

1. Balanza analítica
2. Baño de María
3. Microscopio
4. Portaobjetos
5. Espátula
6. Tubo de ensayo
7. Gradilla
8. Mortero y pilón
9. Pinza metálica
10. Pipetas gotero
11. Clorhidrato de fenilhidrazina
12. Acetato de Sodio
13. Ácido acético glacial
14. Solución de carbohidrato

Procedimiento:

1. Use la espátula para pesar 0.5g de clorhidrato de fenilhidrazina en la balanza analítica.
2. De la misma manera pese 0.1g de acetato de sodio en la balanza analítica.
3. Combine las 2 cantidades obtenidas triturándolos en el mortero.
4. Use la espátula para trasladar la nueva muestra obtenida al tubo de ensayo sosteniéndolo siempre con la pinza metálica.
5. Utilice el gotero para extraer acido acético lo cual solo agregara 10 gotas del acido en el tubo de ensayo.
6. Utilice otro gotero para extraer la solución de carbohidrato y agregar solo 5ml de la solución en el tubo de ensayo.
7. Llevar el tubo de ensayo al baño de María (100°C) por 30 minutos.
8. Después del tiempo dado con la pinza retirar el tubo de ensayo del baño María.
9. Extraer un poco de la sustancia del tubo de ensayo con el gotero.
10. Dejar el tubo de ensayo en la gradilla.
11. Agregar unas gotas de la solución del gotero en el portaobjetos.
12. Y por último trasladar el portaobjetos al microscopio para observar y analizar los cristales que se encuentran en la muestra (Amrita, 2016).

Referencias bibliográficas:

Vibzz lab (2020, junio 25). Osazone Test: for reducing sugars-Biochemistry practical. [Video 1:51 a 3:28]. Recuperado de: https://www.youtube.com/watch?v=R2Jhyp7ZU5s&t=88s

Fischer, H. E. (1888). Bioquímica PUCV, 12(20-21). Chile (2005). Recuperado de: http://www.bioquimica.ucv.cl/documentos/revista/revista%20n12.pdf

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