Práctica 6 y 11 “Conteos de eritrocitos, leucocitos y reticulocitos”

Barrios Huerta Marisol Jesús Menequin Gómez

Muñoz Escandón Jessica Jazmin Rojas Zarza Oscar Humberto

Práctica 6 y 11 “Conteos de eritrocitos, leucocitos y reticulocitos”

TÉCNICA: Conteo manual de GR y GB con hemocitómetro

DESARROLLO[pic 1]

Materiales:

• Muestra de sangre con anticoagulante
• Pipeta de Thoma para cuenta de leucocitos
• Pipeta de Thoma para cuenta de eritrocitos
•         Manguera de caucho para pipetas y su boquilla personal
• Solución de Hayem
• Solución de Türk[pic 2][pic 3]
• Hemocitómetro
• Cubreobjetos especial para hemocitómetro
• Contador de una tecla
• Microscopio óptico Conteo de eritrocitos

1. Homogeneizamos la muestra, se introduce al tubo con la muestra la pipeta de Thoma para conteo de GR (con marca 101 en bulbo) y se aspira suavemente hasta llegar a la marca de 0.5. Se mantiene horizontal la pipeta y se limpia la punta con un papel. Luego se introduce la pipeta horizontalmente en el frasco con la solución de Hayem se aspira suavemente hasta la marca 101 por encima del bulbo y obtener dilución 1:200, ir poniendo pipeta en vertical para evitar burbujas. Una vez llena se tapa orificio libre antes de quitar el caucho. Durante 3 minutos tapar ambos extremos con el dedo pulgar e índice y agitar manualmente haciendo ochos, eliminar tres gotas de la muestra en un papel y colocar una gota de la muestra en el hemocitómetro entre el cubreobjetos y la cámara donde el líquido se distribuirá por capilaridad. Para realizar el conteo, el hemocitómetro se coloca al microscopio con un aumento de 40x.Del cuadro central se contarán cinco (cuatro de los extremos y uno central). Las células se cuentan de izquierda a derecha y empezando por los cuadros de la fila superior , luego de derecha a

izquierda de la siguiente fila de cuadros y así sucesivamente hasta completar el cuadro de 1mm2.

1. Conteo leucocitos es similar al conteo de eritrocitos pero cambiamos a la pipeta de Thomas para leucocitos (con una marca de 11 en el bulbo) Debido a que el calibre de esta pipeta es mayor la aspiración debe hacerse con más cuidado. Se extraerá 0.5 de sangre luego se introducirá la pipeta al frasco con solución de Türk hasta la marca de 11 por arriba del bulbo proporcionando dilución 1:20. Eliminar tres gotas y colocar una gota entre el cubreobjetos y la cámara. Se observa con 10x al microscopio. Finalmente el conteo se lleva a cabo contando los cuadros grandes de las esquinas

Conteo total de leucocitos[pic 4]

1. Llenar por capilaridad a la marca de 0-5 de la pipeta de WBC con sangre.

Al exterior de la pipeta se elimina limpiandola con Un trozo de gasa.[pic 5]

1. El reactivo de WBC (ácido acético glacial al 3%) debe dibujarse

A la marca 11 para diluir la sangre.

1. La sangre y el fluido de dilución se mezclan agitando la pipeta vigorosamente en forma horizontal.[pic 6]

Posición durante 2-3 minutos (para asegurar la hemólisis completa de los glóbulos rojos).

Principios del Laboratorio de Hematología Manual Otoño 2016

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1. Se desechan varias gotas (2-4 gotas) de fluido mezclado y se seca el extremo de la pipeta

Con una pieza de material absorbente sin pelusas.

1. La punta de la pipeta se toca en el lado de la Cámara de conteo de hemocitómetro (sin vacilación)

y una gota de un fluido correrá debajo del vidrio de cobertura.

1. Espere unos 2-3 minutos, ya que los leucocitos requieren sedimentación. Es hora de asumir un solo nivel.
2. Número total de celdas en 4 cuadrados en la esquina de cámara de conteo se determina bajo el bajo objetivo de

El microscopio (10X).

1. Para evitar el conteo duplicado de una sola celda, debe

cuenta solo aquellas celdas que tocan la parte inferior y la izquierda fronteras

Diferencial leucocitario

•Cuando el recuento leucocitario es mayor a 40.0 x 109 /L se debe realizar el conteo diferencial en 200 células.

• El barrido del frotis debe hacerse en forma de almena para lograr que la observación sea representativa.
• Es importante incluir los bordes laterales para incluir las células más grandes como monocitos, linfocitos reactivos y células inmaduras.

Cálculos

La fórmula para convertir valores relativos en absolutos nunca debe omitirse ya que son los valores más útiles para la interpretación es la siguiente:

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